【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及与人cd98重链(cd98hc)特异性结合的抗原结合结构域。这些抗原结合结构域可穿过血脑屏障，并且可将与抗原结合结构域缔合的其他剂(例如，治疗活性剂)转运穿过血脑屏障。
技术介绍
1、物质从血液到脑的被动转移受到血脑屏障(bbb)的限制。bbb提供了对中枢神经系统(cns)稳态的精确控制，允许适当的神经元功能并且还保护神经组织免受毒素和病原体的侵害。bbb的改变是不同神经系统疾病的病理和进展的重要组成部分。然而，bbb在向cns递送治疗剂方面存在问题。虽然重组蛋白和抗体疗法已在cns之外示出很大的成功，但此类生物制剂无法有效穿过bbb。因此，一些治疗剂向cns的递送依赖于将治疗剂直接注射到cns。然而，此类注射是侵入性操作，其功效受到含有治疗剂的脑脊液(csf)从脑到血液的快速输出的限制。替代地，针对cns的治疗剂可以高剂量全身施用，以允许治疗剂充分渗透bbb。然而，这种方法可能会由于外周高剂量或为实现高剂量而增加制造和配方负担而产生意外影响。因此，需要用于将治疗剂递送穿过bbb的改进的产品和方法。
【技术保护点】
1.一种与人CD98重链(CD98hc)特异性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1、VH CDR2、VH CDR3以及轻链可变区(VL)CDR1、CDR2和CDR3序列，所述序列包含以下的氨基酸序列：
2.如权利要求1所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含VH和VL，其中所述VH和VL包含与以下的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％相同的氨基酸序列：
3.一种与人CD98hc特异性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含VH和VL，其中所述VH...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种与人cd98重链(cd98hc)特异性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含重链可变区(vh)互补决定区(cdr)1、vh cdr2、vh cdr3以及轻链可变区(vl)cdr1、cdr2和cdr3序列，所述序列包含以下的氨基酸序列：
2.如权利要求1所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含vh和vl，其中所述vh和vl包含与以下的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％相同的氨基酸序列：
3.一种与人cd98hc特异性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含vh和vl，其中所述vh包含以下的氨基酸序列：seq id no:363、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、355、357、359、361、365、367、369、371、373、375、377、379、381、383、385、387、389、401或403。
4.一种与人cd98hc特异性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含vh和vl，其中所述vl包含以下的氨基酸序列：seq id no:364、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221、223、225、356、358、360、362、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、400、402或404。
5.如权利要求1至4中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含vh和vl，所述vh和vl包含以下的氨基酸序列：
6.如权利要求1至5中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域能够穿过血脑屏障(bbb)。
7.如权利要求1至6中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域以500nm至10μm之间的亲和力结合人cd98hc。
8.如权利要求1至7中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域以50nm至500nm之间的亲和力结合人cd98hc。
9.如权利要求1至8中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域以1nm至50nm之间的亲和力结合人cd98hc。
10.如权利要求1至9中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域与食蟹猴cd98hc结合。
11.如权利要求1至10中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域以至少0.45的elisa od450与人cd98hc结合和/或以至少0.45的elisa od450与食蟹猴cd98hc结合。
12.如权利要求1至11中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域被内化到血脑屏障上皮细胞中，任选地其中所述血脑屏障上皮细胞是hcmec/d3细胞。
13.如权利要求1至12中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域以3.1nm至210nm的亲和力结合人cd98hc。
14.如权利要求1至13中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域以3.2nm至1.5μm的亲和力与食蟹猴cd98hc结合。
15.如权利要求13或14所述的抗原结合结构域，其中所述亲和力通过高通量表面等离子体共振(spr)检测来测量。
16.如权利要求1至15中任一项所述的抗原结合结构域，其中相对于用同种型对照处理的hcmec/d3细胞上的cd98hc的细胞表面表达，所述抗原结合结构域不会使hcmec/d3细胞上的cd98hc的细胞表面表达降低超过20％。
17.如权利要求1至16中任一项所述的抗原结合结构域，其中相对于用同种型对照处理的hcmec/d3细胞上的cd98hc的细胞表面表达，所述抗原结合结构域不会使hcmec/d3细胞上的cd98hc的细胞表面表达增加超过50％。
18.如权利要求1至17中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域在血管耗竭的小鼠脑中的积累比同种型对照多至少1.5倍或至少2倍。
19.如权利要求1至18中任一项所述的抗原结合结构域，其中在向小鼠施用后24小时，所述抗原结合结构域的脑:血清浓度比率与同种型对照相比增加至少5倍。
20.如权利要求1至19中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含vh和vl，所述vh和vl包含以下的氨基酸序列：分别地seq id no:46和47；分别地seq id no:367和368；分别地seq id no:369和370；分别地seq id no:371和372；分别地seq id no:373和374；分别地seq id no:375和376；分别地seq id no:377和378；分别地seq id no:379和380；分别地seq id no:381和382；分别地seq id no:383和384；分别地seq id no:385和386；分别地seq id no:387和388；分别地seq id no:389和390；分别地seq id no:391和392；分别地seq id no:393和394；分别地seq id no:395和396；分别地seq id no:397和398；分别地seq id no:399和400；分别地seq id no:401和402；或分别地seq id no:403和404。
21.如权利要求1至20中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含vh和vl，所述vh和vl包含分别地seq id no:14和15的氨基酸序列。
22.如权利要求1至21中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含单个多肽链上的vh和vl。
23.如权利要求1至22中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含单链可变片段(scfv)。
24.如权利要求23所述的抗原结合结构域，其中所述scfv处于取向vh-接头-vl。
25.如权利要求23所述的抗原结合结构域，其中所述scfv处于取向vl-接头-vh。
26.如权利要求24或25所述的抗原结合结构域，其中所述接头为约5至约25个氨基酸，为约5至约20个氨基酸，为约10至约25个氨基酸，或为约10至约20个氨基酸。
27.如权利要求24至26中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述接头包含ggsegkssgsgseskstggs(seq id no:182)或ggggsggggsggggsggggs(seq id no:337)的氨基酸序列。
28.如权利要求23所述的抗原结合结构域，其中所述scfv包含seq id no:318-336中的任一个的氨基酸序列。
29.如权利要求1至21中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域包含第一多肽上的vh和第二多肽上的vl。
30.如权利要求1至29中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域是鼠、嵌合、人源化或人抗原结合结构域，任选地其中所述抗原结合结构域是人源化抗原结合结构域。
31.一种与人cd98hc特异性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域是vhh，所述vhh包含(i)如权利要求1至19和27中任一项所述的抗原结合结构域的vh cdr1、vhcdr2和vh cdr3或(ii)如权利要求1至19和27中任一项所述的抗原结合结构域的vh，任选地其中所述vhh能够穿过血脑屏障(bbb)。
32.一种融合蛋白，其包含如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域和异源蛋白或肽。
33.如权利要求32所述的融合蛋白，其中所述异源蛋白或肽包含以下的氨基酸序列：β-分泌酶1(bace1)、aβ、表皮生长因子受体(egfr)、人表皮生长因子受体2(her2)、tau、载脂蛋白、载脂蛋白e(apoe)、载脂蛋白e4(apoe4)、α-突触核蛋白、cd20、亨廷顿蛋白、朊病毒蛋白(prp)、富亮氨酸重复激酶2(lrrk2)、帕金、早老素1、早老素2、葡萄糖脑苷脂酶(gcase或gba)、颗粒蛋白前体(pgrn)、鞘脂激活蛋白原(psap)、糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白b(gpnmb)、γ分泌酶、死亡受体6(dr6)、淀粉样前体蛋白(app)、p75神经营养因子受体(p75ntr)、胱天蛋白酶6、分拣蛋白(sort)、髓样细胞触发受体2(trem2)、cd33或唾液酸结合性ig样凝集素3(siglec3)、唾液酸结合性ig样凝集素5(siglec5)、唾液酸结合性ig样凝集素7(siglec7)、唾液酸结合性ig样凝集素9(siglec9)、配对免疫球蛋白样2型受体α(pilra)、跨膜4结构域a4a (ms4a4a)、跨膜4结构域a 6a (ms4a6a)或跨膜蛋白106b(tmem106b)、凝聚素(apoj)、络丝蛋白、泛素蛋白连接酶e3a(ube3a)、三肽基肽酶1(cln2/tpp1)、α-l-艾杜糖醛酸酶(idua)、艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(ids)、氨基葡萄糖(n-乙酰基)-6-硫酸酯酶(gns)、乙酰肝素-α-氨基葡萄糖苷n-乙酰基转移酶(hgsnat)和n-乙酰基-α-氨基葡萄糖苷酶(naglu)、n-磺基葡萄糖胺磺基水解酶(sgsh)或其部分。
34.一种抗体，其包含如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域。
35.一种抗体或其抗原结合片段，其与如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域结合相同的人cd98hc表位。
36.一种抗体或其抗原结合片段，其竞争性抑制如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域与人cd98hc的结合。
37.一种多特异性蛋白，其包含第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域是与第二抗原结合结构域连接的如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域，任选地其中所述第二抗原结合结构域与cns抗原特异性结合。
38.一种多特异性蛋白，其包含与抗体或其抗原结合片段连接的如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域，任选地其中所述抗体或其抗原结合片段与cns抗原特异性结合。
39.如权利要求38所述的多特异性蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区。
40.如权利要求39所述的多特异性蛋白，其中如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域任选地经由氨基酸接头连接至所述重链恒定区的c末端。
41.如权利要求37至40中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述多特异性蛋白是双特异性的。
42.如权利要求37至41中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述多特异性蛋白是二价的、三价的或四价的。
43.如权利要求42所述的多特异性蛋白，其中所述多特异性蛋白是二价的。
44.如权利要求42所述的多特异性蛋白，其中所述多特异性蛋白是三价的，任选地其中所述三价蛋白包含与人cd98hc结合的所述抗原结合结构域中的一个和与cns抗原结合的两个抗原结合结构域。
45.如权利要求42所述的多特异性蛋白，其中所述多特异性蛋白是四价的，任选地其中所述四价蛋白包含与人cd98hc结合的所述抗原结合结构域中的两个和与cns抗原结合的两个抗原结合结构域。
46.一种多特异性蛋白，其是三价的和双特异性的，并且包含与结合cns抗原的抗体连接的如权利要求1至29和31中任一项所述的抗原结合结构域，其中所述抗体包含两条重链和两条轻链，并且其中所述抗原结合结构域是任选地经由氨基酸接头连接至所述两条抗体重链中的一条的c末端的scfv。
47.一种多特异性蛋白，其是四价的和双特异性的，并且包含两个如权利要求1至31中任一项所述的抗原结合结构域，和与cns抗原结合的抗体，其中所述抗体包含两条重链和两条轻链，其中所述两个抗原结合结构域中的每个是scfv、fab或vhh，其中所述两个抗原结合结构域中的一个任选地经由氨基酸接头连接至所述抗体重链中的一条的c末端，并且其中所述另一个抗原结合结构域任选地经由氨基酸接头连接至所述另一条抗体重链的c末端。
48.如权利要求38至47中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含含有杵突变的恒定区和含有臼突变的恒定区。
49.如权利要求48所述的多特异性蛋白，其中所述抗原结合结构域任选地经由氨基酸接头连接至所述包含臼突变的恒定区。
50.如权利要求48所述的多特异性蛋白，其中所述抗原结合结构域任选地经由氨基酸接头连接至所述包含杵突变的恒定区。
51.如权利要求46至50中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述氨基酸接头是甘氨酸-丝氨酸接头，任选地其中所述甘氨酸-丝氨酸接头包含氨基酸序列(ggggs)x3(seq id no:183)。
52.如权利要求46至50中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述氨基酸接头是甘氨酸-丝氨酸接头，任选地其中所述甘氨酸-丝氨酸接头包含氨基酸序列(ggsgg)x3(seq id no:338)。
53.如权利要求37至52中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述cns抗原是脑抗原。
54.如权利要求37至53中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述cns抗原不是cd98hc。
55.如权利要求38至54中任一项所述的多特异性蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含降低效应子功能的突变，任选地其中所述降...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·布朗，A·G·古列维奇，H·萨利米，A·G·伊，M·L·唐，T·尼维克长杨，R·加奈桑，S·A·雅恩，L·单，T·比恩利，R·KH·童，A·HM·杨，
申请(专利权)人：艾莱克特有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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