一种重组软骨素6-O-磺基转移酶突变体及其在合成硫酸软骨素C中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组软骨素6‑O‑磺基转移酶突变体及其在合成硫酸软骨素C中的应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术的改造方法通过理性蛋白质工程设计出最佳突变体，对Δ106RnCHST3的蛋白质结构进行改造，克服了野生型Δ106RnCHST3的6‑O‑磺酸化天然活性低都问题，得到最佳突变体Δ106RnCHST3<supgt;F210R/Y310F/A209L/A303S/I173L</supgt;成功实现24h磺酸化率可达46％，相比野生型提升3倍，加快了生物酶制备CSC的工业化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种重组软骨素6-o-磺基转移酶突变体及其在合成硫酸软骨素c中的应用，属于生物工程。

技术介绍

1、硫酸软骨素c(chondroitin sulfate c，csc)的结构特征在于n-乙酰半乳糖胺的c-6羟基被拔质子并进行了磺酸基团修饰，其二糖单元由glcaβ1-3galnac(6s)所组成。硫酸软骨素c在血管疾病方面，表现出抗动脉粥样硬化、抗凝血、抗血栓形成等特性；在神经发育方面，cs在神经信号转导过程中起主要作用，能够改善中枢神经系统的活动，有利于大脑的发育；在骨关节炎方面，可以作为软骨修复和再生的重要分子，还能够充当抗氧化剂和抗炎药物。

2、目前合成csc的途径有三种：组织提取、化学合成和生物合成。(1)组织提取是当前工厂生产csc的主要策略。工业上通常以动物组织为原料来提取csc，该过程涉及一系列复杂且冗长的步骤，存在步骤繁琐、能耗高以及易引入病毒等缺陷。(2)化学合成存在csc链长有限、分子量低：hsieh-wilson等人报道了csc四糖的合成方法，但此方法存在步骤复杂和条件苛刻的问题。(3)生物合成法的关键限制因素在本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.软骨素6-O-磺基转移酶突变体，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示重组软骨素6-O-磺基转移酶的第210位、第310位、第209位、第143位、第173位的氨基酸中的一个或多个进行突变得到的。

2.根据权利要求1所述的软骨素6-O-磺基转移酶突变体，其特征在于，具有(a)～(e)任一突变：

3.编码权利要求1或2所述软骨素6-O-磺基转移酶突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组载体。

5.携带权利要求3所述基因，或权利要求4所述的重组载体的微生物细胞。

6.重组大肠杆菌，其特征在于，表达了权利要求1或2所述的...

【技术特征摘要】

1.软骨素6-o-磺基转移酶突变体，其特征在于，将seq id no.1所示重组软骨素6-o-磺基转移酶的第210位、第310位、第209位、第143位、第173位的氨基酸中的一个或多个进行突变得到的。

2.根据权利要求1所述的软骨素6-o-磺基转移酶突变体，其特征在于，具有(a)～(e)任一突变：

3.编码权利要求1或2所述软骨素6-o-磺基转移酶突变体的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组载体。

5.携带权利要求3所述基因，或权利要求4所述的重组载体的微生物细胞。

6.重组大肠杆菌，其特征在于，表达了权利要求1或2所述的软骨素6-o-磺基转移酶突变体。

7.根据权利要求6所述的重组大肠杆菌，其特征在于，以escherich...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘立明，孟伟伟，魏婉清，宋伟，李晓敏，胡贵鹏，高聪，闻建，刘佳，温碧莹，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：