【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测方法，更具体的是涉及一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法。
技术介绍
1、四君子汤是一种经典的中药复方，其由党参、白术、茯苓、甘草四味药材组成，常用于治疗脾胃虚弱、气短乏力等症状，具有健脾益气之功效。传统中药复方的药效物质基础及其体内代谢研究，长期以来受到中药研究领域的关注。随着现代药理学和分析化学技术的发展，中药血清药物化学为研究中药复方的药效物质基础和体内药代动力学提供了重要的研究手段。
2、中药血清药物化学是一门基于现代分离与分析技术的应用科学，其核心思想是通过制备含药血清，结合指纹图谱和现代分析手段，解析血清中的化学成分，包括原型药物、代谢产物及应激性成分，以推断中药复方发挥药效的物质基础及其代谢机制。与传统的中药化学研究方法相比，中药血清药物化学在灵敏度、分离效果及分析效率方面具有显著优势，特别是其能够揭示药物在体内代谢过程中的动态变化，为研究中药复方的配伍规律及药效成分提供了关键技术支持。
3、以四君子汤为代表的传统中药复方，其化学成分复杂，涉及多种生物过程，包括肠道菌群代谢、肝药酶代谢及跨膜转运吸收等。在此过程中，各种化学成分相互作用，并通过代谢转化生成活性成分，从而实现治疗作用。然而，目前对四君子汤体内代谢过程的研究仍较为有限。
4、因此，开发一种针对四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，对于深入理解其药效物质基础及药代动力学特征具有重要意义，同时也为中药复方的现代化研究提供了新的技术路径。
技术实现思路
1
2、一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，所述的检测方法包括以下步骤：
3、s1、四君子汤水煎药的制备：按四君子汤处方，取人参、白术、茯苓各9克，炙甘草6克制备水煎药：
4、s2、含药血清的制备：选用雄性sd大鼠灌胃浓缩的四君子汤水煎药，剂量为1ml/100g，连续7天，每天1次；静置后离心，取上层血清，用0.22μm微孔滤膜除菌，-80℃保存；
5、s3、样品的处理：将含药血清与甲醇混合，超声提取、离心后取上清液，加热浓缩蒸干，加入甲醇溶解，经0.45μm滤膜过滤后进样分析；
6、s4、分析条件如下：
7、色谱条件：使用betasil c18色谱柱4.6mm×250mm，5μm，流动相为水和乙腈，流速0.4ml/min，进样量20μl；
8、质谱条件：电喷雾离子源esi，负离子模式，喷雾电压3.5kv，毛细管温度300℃，全离子扫描范围m/z：100-1200；
9、s5、采用hplc-ms-ms对四君子汤水煎药及含药血清的化学成分进行定性分析。
10、进一步的，s1还包括以下子步骤：
11、s101：将四种原料加水10倍浸泡0.5小时后，加热煮沸煎煮1小时，过滤分离滤液和残渣；
12、s102：残渣加水6倍煮沸，煎煮1小时后过滤；
13、s103：再将残渣加水煮沸1小时后过滤，合并三次滤液；
14、s104：浓缩至药液浓度为0.125g/ml，低温4℃保存。
15、进一步的，s2中末次给药后禁食12小时以上，末次给药后2小时麻醉取血。
16、进一步的，s2中离心速率为3000转/分钟，时间为10min。
17、进一步的，梯度洗脱条件如下：
18、
19、进一步的，色谱柱柱温为35℃。
20、进一步的，s5中对四君子汤水煎药及含药血清的化学成分进行定性分析时，检测波长为210nm、240nm、280nm。
21、进一步的，检测结果为四君子汤水煎药中10种化学物质，包括皂苷类7种和黄酮类3种；含药血清中5种代谢成分。
22、有益效果：
23、本专利技术提供了一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，通过高效液相色谱-质谱联用技术(hplc-ms)对四君子汤水煎药及其含药血清的化学成分进行定性分析。该方法包括以下步骤：按四君子汤处方比例制备水煎药，经大鼠灌胃连续给药7天后，采集血清并处理，通过betasil c18色谱柱和梯度洗脱条件，结合负离子模式下的电喷雾离子化质谱，对水煎药和血清中化学成分进行分离与鉴定。实验结果表明，水煎药中检测到10种化学成分，包括7种皂苷类化合物和3种黄酮类化合物；含药血清中检测到5种化学成分，包括3种原型成分人参皂苷rb1、re和甘草酸及2种代谢产物甘草次酸和甘草素葡萄糖醛酸。本方法具有灵敏度高、分离效果优异的特点，能够精确揭示四君子汤的药效物质基础及其代谢机制，为中药复方的现代化研究与质量控制提供科学依据，并具有广泛的应用价值。
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1.一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，S1还包括以下子步骤：
3.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，S2中末次给药后禁食12小时以上，末次给药后2小时麻醉取血。
4.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，S2中离心速率为3000转/分钟，时间为10min。
5.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，梯度洗脱条件如下：
6.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，色谱柱柱温为35℃。
7.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，S5中对四君子汤水煎药及含药血清的化学成分进行定性分析时，检测波长为210nm、240nm、280nm。
8.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，检测
...【技术特征摘要】
1.一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，s1还包括以下子步骤：
3.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，s2中末次给药后禁食12小时以上，末次给药后2小时麻醉取血。
4.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎药及含药血清的检测方法，其特征在于，s2中离心速率为3000转/分钟，时间为10min。
5.根据权利要求1所述的一种四君子汤水煎...
【专利技术属性】
技术研发人员：尚如霞，姚尚文，
申请(专利权)人：镇江市食品药品监督检验中心，
类型：发明
国别省市：
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