从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，该方法包括：(1)将心脏转移到超净台内；(2)在升主动脉处连接导流管并结扎固定；(3)从导流管处注射EDTA缓冲液，注射速率为1.5‑2.5ml/min；(4)从导流管处注射perfusion缓冲液，注射速率同上；(5)从导流管处注射消化酶缓冲液，注射速率为1.0‑1.5ml/min；(6)重复步骤(5)至心脏被消化完全；(7)去掉主动脉和心房组织，轻轻撕碎剩余部分，继续加入消化酶缓冲液并轻轻吹打至心室组织解离成单个细胞；(8)加入消化终止液，轻柔吹打；将细胞悬液过滤、离心即得心肌细胞。该分离流程不依赖于langendorff灌流系统。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药，具体涉及一种从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法。

技术介绍

1、心血管疾病是世界范围内人类死亡的最重要原因之一，为了模拟心脏病理或生理状态，以及进行相关的基因组学、表观基因组学、转基因和基因治疗研究，为心血管疾病的治疗提供方案，就必须在体外培养心肌细胞。

2、然而，成年哺乳动物的心肌细胞不仅与相邻细胞和细胞外基质紧密相连，而且相邻心肌细胞之间还具有闰盘结构，其中细胞膜呈凹凸状，并特别分化形成桥粒，彼此紧密相连；这使得分离完整的成年哺乳动物心肌细胞变得非常困难。同时，成年哺乳动物的心肌细胞在分离过程中容易受到机械损伤、酶损伤、缺氧、ph和离子波动的影响，导致分离失败或分离获得的心肌细胞活性降低。

3、为了提高心肌细胞的分离效率，1898年，langendorff o专利技术了心脏灌注法，用于分离成年小鼠心肌细胞。心脏灌注法的实施流程大概是：将切除的心脏安装在langendorff灌流系统上，从升主动脉处插入套管，将消化酶缓冲液从该套管处注入，通过主动脉根部的冠状窦进入冠状动脉循环，实现心脏的完全消化，灌注过本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，将实验动物处死后置于酒精浸泡，然后转移到超净台中。

3.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，取出心脏后将心脏快速置于EDTA buffer中以防止血液凝固。

4.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中，EDTA buffer的组成为：NaCl 130mM，KCl 5mM，NaH2PO40.5mM，...

【技术特征摘要】

1.一种从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，将实验动物处死后置于酒精浸泡，然后转移到超净台中。

3.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(1)中，取出心脏后将心脏快速置于edta buffer中以防止血液凝固。

4.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中，edta buffer的组成为：nacl 130mm，kcl 5mm，nah2po40.5mm，hepes10mm，glucose10mm，bdm 10mm，taurine 10mm，edta 5mm，使用dddh2o溶解后调节ph至7.80。

5.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中，edta buffer的注射量为4-6ml。

6.如权利要求1所述的从成年小鼠心脏中无菌分离心肌细胞的方法，其特征在于，步骤(4)中，perfusion buf...

【专利技术属性】
技术研发人员：简冬冬，齐大屯，简立国，沈佳，李润华，石英超，王晨秋，李涵，金守毅，唐颢，邢珺月，李臻，程晓雷，
申请(专利权)人：阜外华中心血管病医院，
类型：发明
国别省市：