【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种r298l基因缺失非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用。
技术介绍
1、非洲猪瘟(african swine fever，asf)是由非洲猪瘟病毒(african swine fevervirus，asfv)感染引起的猪的一种急性、热性、高度接触性动物烈性传染病，世界动物卫生组织将其列为法定报告a类动物疫病。该病具有病程短、传播快、病死率高达100％的特点。由于该病毒基因组巨大，编码一百多种病毒蛋白，结构复杂，目前仍有接近50％的病毒蛋白与宿主的相互作用机制尚不清楚，增加了疫苗的研究难度，迄今为止尚无安全有效的疫苗可用。因此，探究非洲猪瘟病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用机制，可以深入了解asfv的致病机理，挖掘病毒的毒力基因，为高效疫苗的设计提供理论依据。
2、asfv是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员，基因组为170-193kb的双链dna，直径约260nm，由类核、核心壳、内膜、衣壳和外囊膜五层结构组成，包含150-167个开放阅读框，可以编码超过150种病毒蛋白，包括超过50种结构蛋白，100多种非结构蛋白。非洲猪瘟病毒蛋白r298l是一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，该类激酶通过包括磷酸化修饰在内的转录后修饰调节细胞内各种通路里关键接头蛋白的活性和水平，控制细胞内通路的激活，进一步调节细胞的代谢、炎症反应，甚至凋亡，坏死等决定细胞命运的过程，从而影响病毒的复制，目前尚无r298l基因缺失毒株的相关研究报道。
3、迄今为止，仍无有效的商品化疫苗可用，传统的灭活疫苗没有
4、l83l和r298l均能抑制干扰素通路的表达，但是已有文献表明l83l敲除的非洲猪瘟病毒的毒力和野毒株一样强，并不适用于减毒株的制备。而本专利技术通过基因工程技术在非洲猪瘟亲本毒株asfv/cn/gs/2018中缺失了r298l基因，得到了一株高安全性的非洲猪瘟候选疫苗减毒株，降低了该病毒对猪的致病性，能够显著诱导免疫猪产生抗体保护，可作为安全和有效的非洲猪瘟候选疫苗，具有极大的社会应用价值。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种构建非洲猪瘟减毒株的策略，所述策略是通过以下技术方案实现的：
2、第一方面，本专利技术提供了通过在ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018中缺失r298l基因制备非洲猪瘟减毒株的应用，所述ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018已于2020年12月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v202096。
3、优选地，所述r298l基因序列如seq id no.1所示。
4、第二方面，本专利技术提供了通过在ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018中缺失r298l基因制备非洲猪瘟减毒疫苗的应用，所述ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018已于2020年12月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v202096。
5、优选地，所述r298l基因序列如seq id no.1所示。
6、第三方面，本专利技术提供了一种基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株为r298l基因缺失的ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018，所述ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018已于2020年12月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v202096。
7、优选地，所述r298l基因序列如seq id no.1所示。
8、第四方面，本专利技术提供了上述第三方面所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株在制备非洲猪瘟疫苗中的应用。
9、第五方面，本专利技术提供了一种非洲猪瘟减毒疫苗，所述非洲猪瘟减毒疫苗包括上述第三方面所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株。
10、第六方面，本专利技术提供了上述第三方面所述减毒非洲猪瘟病毒株的制备方法，所述方法为：通过基因工程手段将亲本非洲猪瘟病毒株r298l基因的全部或部分核苷酸序列缺失使r298l基因编码蛋白的功能丧失。
11、优选地，所述方法为同源重组技术，所述方法包括以下步骤：
12、(1)设计asfv r298l基因上下游序列作为左右同源重组臂，并分别克隆入puc19载体中，获得重组转移载体；
13、(2)在步骤(1)所述重组转移载体左、右臂基因序列中插入筛选表达盒基因片段，获得同源重组转移载体；
14、(3)将步骤(2)所述同源重组转移载体转染至感染了亲本非洲猪瘟毒株的bmdm细胞，纯化筛选获得r298l基因编码蛋白功能丧失的减毒非洲猪瘟病毒株。
15、本专利技术的有益效果是：本专利技术通过丧失ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018的r298l基因编码蛋白的功能，获得了一种减毒非洲猪瘟病毒株，所述的减毒非洲猪瘟病毒株毒力显著致弱，具有良好的安全性能。通过在亲本毒株(ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018)中丧失r298l基因编码蛋白的功能，进而降低了亲本毒株的毒性，获得的减毒非洲猪瘟病毒能对非洲猪瘟病毒亲本毒株的攻击提供良好的免疫保护作用，且安全性高，适于作为预防非洲猪瘟的疫苗候选株。
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1.通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS2018中缺失R298L基因制备非洲猪瘟减毒株的应用，其特征在于，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述R298L基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.通过在II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS2018中缺失R298L基因制备非洲猪瘟减毒疫苗的应用，其特征在于，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202096。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述R298L基因序列如SEQ ID NO.1所示。
5.一种基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株为R298L基因缺失的II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS2018，所述II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V202
6.如权利要求5所述的减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述R298L基因编码蛋白的序列如SEQ ID NO.2所示；所述R298L基因序列如SEQ ID NO.1所示。
7.如权利要求5或6所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株在制备非洲猪瘟疫苗中的应用。
8.一种非洲猪瘟减毒疫苗，其特征在于，所述非洲猪瘟减毒疫苗包括权利要求5或6所述的基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株。
9.如权利要求5或6所述减毒非洲猪瘟病毒株的制备方法，其特征在于，所述方法为：通过基因工程手段将亲本非洲猪瘟病毒株R298L基因的全部或部分核苷酸序列缺失使R298L基因编码蛋白的功能丧失。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法为同源重组技术，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.通过在ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018中缺失r298l基因制备非洲猪瘟减毒株的应用，其特征在于，所述ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v202096。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述r298l基因序列如seq id no.1所示。
3.通过在ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018中缺失r298l基因制备非洲猪瘟减毒疫苗的应用，其特征在于，所述ii型非洲猪瘟病毒株asfv cn/gs2018保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v202096。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述r298l基因序列如seq id no.1所示。
5.一种基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株，其特征在于，所述基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株为r298l基因缺失的ii型非洲猪瘟病毒株asfv...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑海学，李伟伟，范许许，齐晓兰，朱紫祥，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心，
类型：发明
国别省市：
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