【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本披露总体上涉及一种用于富集能够结合生物样品中的一种或多种生物分子的多个适体的方法。
技术介绍
1、指数富集的配体系统进化法(selex)是目前用于从具有随机序列的大池中分离靶分子的高亲和力适体的常用方法。可以选择针对各种靶标的适体。适体对其靶分子具有高亲和力和特异性。然而，已经开发了许多selex选择方法用于分离靶向单个分子的适体。由于适体选择的低成功率，选择过程中的许多因素仍然不明确。
2、引用列表
3、专利文献
4、[ptl 1]us2006/0160763
5、非专利文献
6、[npl 1]keefe等人,aptamers as therapeutics[作为治疗剂的适体].nat.rev.drug discov[自然评论药物发现].2010；9:537-550。
7、[npl 2]jayasena s.d.aptamers:an emerging class of molecules thatrival antibodies in diagnostics[...
【技术保护点】
1.一种用于富集能够结合生物样品中的一种或多种生物分子的多个适体的方法，该方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，该方法进一步包括(v)扩增能够结合这些生物样品中的生物分子的该多个适体以形成适体文库。
3.如权利要求2所述的方法，其中通过聚合酶链式反应(PCR)扩增能够结合这些生物样品中的生物分子的该多个适体。
4.如权利要求3所述的方法，其中该PCR是乳化PCR。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中步骤(ii)进一步包括从该第一电泳介质的其余部分切除包含该多个适体-生物分子复合物的该第一电泳介质的该部分。p>
6.如权利...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于富集能够结合生物样品中的一种或多种生物分子的多个适体的方法，该方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，该方法进一步包括(v)扩增能够结合这些生物样品中的生物分子的该多个适体以形成适体文库。
3.如权利要求2所述的方法，其中通过聚合酶链式反应(pcr)扩增能够结合这些生物样品中的生物分子的该多个适体。
4.如权利要求3所述的方法，其中该pcr是乳化pcr。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中步骤(ii)进一步包括从该第一电泳介质的其余部分切除包含该多个适体-生物分子复合物的该第一电泳介质的该部分。
6.如权利要求5所述的方法，其中将该第一电泳介质的该部分装配到该第二电泳介质中的孔中，以在该第二方向上进行电泳。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该第一电泳介质是第一琼脂糖凝胶。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该第二电泳介质是第二琼脂糖凝胶。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中该第一和该第二电泳介质包含浓度在100mm与200mm之间的钠离子、钾离子、锂离子、铵离子或其任何组合。
10.如权利要求9所述的方法，其中该钠离子呈氯化钠的形式。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该第一和该第二电泳介质包含浓度为10mm或更低的镁离子、钙离子、铜离子、锌离子或其任何组合。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中该第一和该第二电泳介质包含浓度在0.5mm与2mm之间的镁离子、钙离子、铜离子、锌离子或其任何组合。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中该第一和该第二电泳介质包含浓度为1mm的镁离子、钙离子、铜离子、锌离子或其任何组合。
14.如权利要求11-13中任一项所述的方法，其中该镁离子呈氯化镁的形式。
15.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中在该第一方向和该第二方向上的电泳在10℃与20℃之间的温度下进行。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中该生物样品是血清、血浆、脑脊液(csf)、尿液、羊水、骨髓、支气管肺泡灌洗液、颊拭子、粪便、胃肠液、吸脂样品、唾液、乳、鼻拭子、腹膜液、精液、痰、滑液、泪液、阴道液、组织活检或细胞裂解物。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中该生物样品中的生物分子包含核酸、蛋白质、多肽、碳水化合物、脂质或其组合。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中该生物样品未被变性。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中在与该多个候选适体接触之前，将该生物样品以1:200与1:2之间的比率稀释。
20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，该方法进一步包括在与该多个候选适体接触之前使该生物样品与多个竞争核酸接触。
21.如权利要求20所述的方法，其中该多个竞争核酸是一组随机的不相关核酸。
22.如权利要求20或21所述的方法，其中该多个竞争核酸是鲑鱼精子dna。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中该多个候选适体是单链dna(ssdna)、双链dna(dsdna)、单链rna或肽。
24.如权利要求23所述的方法，其中该多个候选适体是单链dna(ssdna)。
25.如权利要求24所述的方法，其中该多个候选适体中的每一个包含修饰的核苷酸。
26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中该多个候选适体中的每一个被标记。
27.如权利要求26所述的方法，其中该多个候选适体中的每一个被荧光标记。
28.如权利要求1-27中任一项所述的方法，该方法进一步包括在步骤(iv)之前，从该第二电泳介质的其余部分切除含有该多个适体-生物分子复合物的该第二电泳介质的该部分，以及从该第二电泳介质的该部分提取该多个适体-生物分子复合物。
29.如权利要求2-28中任一项所述的方法，其中步骤(i)-(v)重复至少4次，并且其中当重复步骤(i)时，将步骤(v)中获得的能够结合生物样品中的生物分子的该多个适体用作起始的多个候选适体。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中(i)-(iv)重复至少9次，并且其中当重复步骤(i)时，将步骤(iv)中获得的能够结合生物样品中的生物分子的该多个适体用作起始的多个候选适体。
31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，该方法进一步包括鉴定能够结合该生物样品中的生物分子的该多个适体的序列。
32.如权利要求31所述的方法，其中鉴定能够结合该生物样品中的生物分子的该多个适体的序列包括下一代测序(ngs)。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，该方法进一步包括鉴定与该多个适体结合的生物分子，该多个适体能够结合该生物样品中的生物分子。
34.如权利要求32或33所述的方法，该方法进一步包括将能够结合该生物样品中的生物分子的该多个适体的序列信息和/或与该多个适体结合的这些生物分子的信息编译并存储为计算机可读格式。
35.一种适体数据库，其包含通过如权利要求1-34中任一项所述的方法产生的一个或多个适体文库的信息，其中每个适体文库包含能够结合生物样品中的生物分子的适体。
36.一种用于分析靶生物样品的靶适体文库的方法，该方法包括：
37.如权利要求36所述的方法，其中步骤(ii)中的该第二适体数据库是如权利要求35所述的适体数据库。
38.如权利要求36或37所述的方法，其中该第一适体数据库和该第二适体数据库是相同的。
39.如...
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