【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其涉及一种中药作用蛋白靶点的筛选方法。
技术介绍
1、中药中存在着广泛的与靶点结合的小分子，中药化学成分与靶标蛋白质结合发挥重要药效作用。小分子通过直接与蛋白质的三维结构结合，能够影响蛋白质结构和功能，进而调控机体发生级联反应以发挥重要作用。中药以及天然产物来源于自然界，具备药物活性，但是其作用靶点未知，发现和确证其药物靶点对研究其作用机制和成药性改造，价值重大。
2、生物芯片技术作为一种常规的鉴定小分子药物靶点的手段，其在利用药物靶点芯片确定小分子作用靶点的过程中，必须对小分子进行标记追踪。然而，该方法要求小分子的结构-活性关系（structure-activity relationship, sar）明确，并且能够进行标记。鉴于中药是一个复杂的化学体系，其中包含大量不同种类的化合物分子，实现对所有化合物分子的标记极具挑战性。因此，生物芯片技术在中药复杂体系靶点领域的应用遭遇了技术瓶颈。
3、中国专利cn101034060a公开了一种量子点纳米技术结合生物芯片技术寻找中药有效成分作用靶点的方法，将量子点与中药有效成分进行连接，形成一种“量子点－中药有效成分”荧光探针，然后将这种荧光探针直接与生物芯片共孵育，经过洗涤后，根据生物芯片上量子点受光激发而发出的荧光来确定药物与芯片上固定的已知蛋白质之间特异性的结合位点(即靶点)，进而通过计算机软件分析这些结合位点的蛋白。本专利技术可简便、快速地寻找中药有效成分对细胞产生药效的靶蛋白，可为研究中药药理和高通量地筛选中药新药提供高效的技术
4、然而，既有的技术尚未能规避标记中药活性成分这一过程的复杂性与实施难度，进而无法实现有效靶点筛选预测。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种中药作用蛋白靶点的筛选方法，能够实现更加简单和高效地检测中药复杂化学体系靶点蛋白。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种中药作用蛋白靶点的筛选方法，包括以下步骤：
4、将蛋白加样至微阵列芯片，得到加样后的微阵列芯片；
5、将加样后的微阵列芯片分为药物组和抑制剂组；
6、药物组中，加样后的微阵列芯片经过中药待测物孵育处理和蛋白抑制剂孵育处理；
7、抑制剂组中，加样后的微阵列芯片只经过蛋白抑制剂孵育处理；
8、所述蛋白抑制剂能够与所述蛋白明确结合；
9、所述蛋白抑制剂孵育处理后，通过可视化反应呈现结合信号强度；
10、将药物组和抑制剂组的结合信号强度进行比较：
11、与抑制剂组相比，药物组的结合信号强度较低，说明该蛋白是中药待测物的作用靶点；
12、所述蛋白抑制剂为修饰有荧光基团的化学探针。
13、优选的，所述荧光基团选自alexa fluor 染料系列、fam、cy2、cy3、cy5、tritc、fitc、hoechst 33258、dapi、yoyo-1、sytox green、tet、hex、vic、rox、texas red、allophycocyanin、propidium iodide、ethidium bromide或gfp中的一种或几种。
14、优选的，所述蛋白为激酶蛋白、转录因子蛋白、g蛋白偶联受体蛋白、离子通道蛋白、核受体蛋白、蛋白酶或氧化还原酶。
15、优选的，所述蛋白为激酶蛋白，所述蛋白抑制剂为广谱激酶探针，更优选为xo44炔基探针。
16、优选的，所述激酶蛋白为mapk1。
17、优选的，所述蛋白为转录因子蛋白，所述蛋白抑制剂为碘乙酰胺炔基探针，更优选为iaa炔基探针。
18、优选的，所述转录因子蛋白为nfkb1-p50蛋白。
19、优选的，所述蛋白为氧化还原酶，所述蛋白抑制剂为碘乙酰胺炔基探针，更优选为iaa炔基探针。
20、优选的，所述氧化还原酶为idh1蛋白。
21、本专利技术的有益效果：
22、本专利技术利用探针与中药复杂体系竞争，与靶点结合的中药分子会减弱探针的结合，靶点结合中药分子后信号强度会降低，以此来判断中药复杂体系是否与靶点结合，且能够明确结合位点；相比于传统的检测方法，不需要对中药分子进行标记，能在较短的时间检测中药复杂化学体系靶点筛选，本方法经济快捷，不需要使用大型仪器即可得到数据，检测结果是基于竞争分子，特异性强，信号稳定，适于推广应用。
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1.一种中药作用蛋白靶点的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述荧光基团选自Alexa Fluor 染料系列、FAM、Cy2、Cy3、Cy5、TRITC、FITC、Hoechst 33258、DAPI、YOYO-1、SYTOX Green、TET、HEX、VIC、ROX、Texas Red、Allophycocyanin、Propidium Iodide、Ethidium Bromide或GFP中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述蛋白为激酶蛋白、转录因子蛋白、G蛋白偶联受体蛋白、离子通道蛋白、核受体蛋白、蛋白酶或氧化还原酶。
4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述蛋白为激酶蛋白，所述蛋白抑制剂为广谱激酶探针。
5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述激酶蛋白为MAPK1。
6.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述蛋白为转录因子蛋白，所述蛋白抑制剂为碘乙酰胺炔基探针。
7.根据权利要求6所述的筛选方
8.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述蛋白为氧化还原酶，所述蛋白抑制剂为碘乙酰胺炔基探针。
9.根据权利要求8所述的筛选方法，其特征在于，所述氧化还原酶为IDH1蛋白。
...【技术特征摘要】
1.一种中药作用蛋白靶点的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述荧光基团选自alexa fluor 染料系列、fam、cy2、cy3、cy5、tritc、fitc、hoechst 33258、dapi、yoyo-1、sytox green、tet、hex、vic、rox、texas red、allophycocyanin、propidium iodide、ethidium bromide或gfp中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述蛋白为激酶蛋白、转录因子蛋白、g蛋白偶联受体蛋白、离子通道蛋白、核受体蛋白、蛋白酶或氧化还...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈鹏，杨洪军，崔钊，黎彩凤，
申请(专利权)人：中国中医科学院医学实验中心，
类型：发明
国别省市：
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