一种基于IL2受体二聚化的报告基因细胞系及其制备方法和应用技术

本申请涉及生物技术领域，具体公开了一种基于IL2受体二聚化的报告基因细胞系及其制备方法和应用。该制备方法包括：选择H_IL2RB(p.1to270)、H_IL2RG(p.1to290)为目的基因，并将其分别与蛋白标签SmBiT和LgBiT连接进行人工合成，获得报告基因片段；利用EcoRI和BamHI，将所述报告基因片段插入慢病毒质粒空载体，得到重组质粒；将所述重组质粒转染至慢病毒包装细胞，获得重组病毒；将所述重组病毒转入宿主细胞中，进行筛选后，得到基于IL2受体二聚化的报告基因细胞系。本申请通过设计和改造IL‑2受体复合物与报告基因的连接方式，构建结构稳定的IL‑2受体复合物的报告基因细胞系，对于体外研究IL‑2与IL‑2受体的相互作用、免疫动物制备抗体或抗体的体外筛选等具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物，更具体地说，它涉及一种基于il2受体二聚化的报告基因细胞系及其制备方法和应用。

技术介绍

1、白细胞介素(ils)是一类细胞因子，最初被发现由白细胞表达，目前已发现至少超过38种。白细胞介素2(interleukin-2，il-2)是最早发现的细胞因子之一，又称为t细胞生长因子(t cell growth factor,tcgf)，是一种重要的免疫调节因子。

2、il-2是最早的一类免疫治疗药物，但其必须以很高的剂量才能产生效果，且毒性很强，会引发致命的血管泄漏综合征和其它副作用。之后，有研究发现，il-2其实具有双重活性。高剂量的il-2能促进t细胞增殖，驱动抗肿瘤活性，但也会激活调节性t细胞(tregs)；低剂量il-2仅激活调节性t细胞，抑制免疫细胞的免疫反应，可以治疗自身免疫性疾病。

3、il-2的受体interleukin-2receptor(il-2r)包含α、β和γ三个亚单位。三个亚单位可以组成不同亲和力的受体，其中，单独的il-2rα为低亲和力受体，单独存在不参与信号传导，il-2rβ和il-2rγ组本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于IL2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，其包括：

2.根据权利要求1所述的基于IL2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，所述报告基因片段分别为：

3.根据权利要求2所述的基于IL2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，所述报告基因片段的核苷酸序列分别为：

4.根据权利要求1所述的基于IL2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，所述慢病毒质粒空载体为 lenti-CMV-MCS-PGK-Puro、lenti-CMV-MCS-PGK-Blasticidin。

5.根据权利要求4所...

【技术特征摘要】

1.一种基于il2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，其包括：

2.根据权利要求1所述的基于il2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，所述报告基因片段分别为：

3.根据权利要求2所述的基于il2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，所述报告基因片段的核苷酸序列分别为：

4.根据权利要求1所述的基于il2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，所述慢病毒质粒空载体为 lenti-cmv-mcs-pgk-puro、lenti-cmv-mcs-pgk-blasticidin。

5.根据权利要求4所述的基于il2受体二聚化的报告基因细胞系的制备方法，其特征在于，在获得重组质粒过程中，所述ptre2-f引物的氨基酸序列如seq id no.5所示；所述pgk-r引物的氨基酸序列如seq id no.6所示。

6.根据权利要求1所述的基于il2受体二聚化的报告基...

【专利技术属性】
技术研发人员：文丽瑛，柴盼盼，董海阳，
申请(专利权)人：吉满生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：