一种树鼩SMSCs的分离方法、永生化SMSCs、构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种树鼩SMSCs的分离方法、树鼩永生化SMSCs、构建方法和应用，涉及树鼩永生化SMSCs构建技术领域，本发明专利技术采用混合酶消化获得成年原代树鼩SMSCs，利用反复差速贴壁纯化，通过CCK8增殖试验观察SMSCs生长曲线、HE染色观察细胞形态、流式细胞术检测细胞周期和凋亡的情况、免疫荧光和RT‑PCR鉴定相关标志基因和蛋白表达。采用血清撤离方法诱导成肌分化，免疫荧光染色检测成肌分化情况。采用成脂诱导剂(DMEM/F12+0.5mmo/L IBMX+10μg/mL INS+1μmo/L DEX+1μmo/L罗格列酮+10％FBS+10％HS+1％双抗)诱导成脂分化，油果O染色鉴定成脂分化后脂滴形成情况。将分离纯化后P3代细胞，用SV40过表达慢病毒进行转染，通过CCK8检测转染永生化后细胞活力、免疫荧光鉴定标志性蛋白表达、RT‑PCR检测SV40基因表达以及细胞衰老检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及树鼩永生化smscs构建，更具体地说是涉及一种能稳定传代的树鼩永生化smscs、构建方法和应用。

技术介绍

1、树鼩(tree shrew，tupaia belangeri chinensis)是一种新型的实验动物，近年来逐渐受到国内外学者的关注和应用。树鼩属攀鼩目树鼩科，我国的广西壮族自治区、云南、贵州等地树鼩资源丰富。树鼩兼具体型小、生殖与发育周期短、易饲养、价格低、寿命长、孕期短、多胎等诸多优势。树鼩作为实验动物在生命和医学领域的应用已有30多年历史。树鼩，与灵长类动物具有更高同源性。中国科学院昆明动物研究所基于树鼩骨骼肌蛋白质组数据的系统发育树分析表明，树鼩更接近灵长类动物(人)，而不是啮齿类动物(小鼠和大鼠)。因此，越来越多的研究将树鼩运用于肌肉损伤模型中。

2、自1961年mauro a学者利用电镜从青蛙胫前肌中首次成功分离出骨骼肌卫星细胞(skelatal muscle satellite cells,smscs)后，有关人、鼠、牛、兔、马、羊、鸡以及鹅等各类物种的smscs均建立起成熟的分离培养方案。目前，树鼩sm本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种树鼩SMSCs的分离方法，其特征在于，过程包括：

2.根据权利要求1所述的一种树鼩SMSCs的分离方法，其特征在于，所述消毒处理为：将腘蝇肌放入装有75％酒精的离心管中漂洗10s，转移至装有2％四抗和1％FBS的HBSS溶液的离心管中，置于冰盒中转移至无菌超净工作台；将肌肉组织置于60mm的培养皿上，用含有8％四抗和1％FBS的D-Hanks的洗涤液中反复刷洗2-3次。

3.根据权利要求2所述的一种树鼩SMSCs的分离方法，其特征在于，所述去除杂质为：以无菌眼科剪和眼科镊去除结缔组织、筋膜、血管、脂肪杂质。

4.根据权利要求3所述的一种树鼩SM...

【技术特征摘要】

1.一种树鼩smscs的分离方法，其特征在于，过程包括：

2.根据权利要求1所述的一种树鼩smscs的分离方法，其特征在于，所述消毒处理为：将腘蝇肌放入装有75％酒精的离心管中漂洗10s，转移至装有2％四抗和1％fbs的hbss溶液的离心管中，置于冰盒中转移至无菌超净工作台；将肌肉组织置于60mm的培养皿上，用含有8％四抗和1％fbs的d-hanks的洗涤液中反复刷洗2-3次。

3.根据权利要求2所述的一种树鼩smscs的分离方法，其特征在于，所述去除杂质为：以无菌眼科剪和眼科镊去除结缔组织、筋膜、血管、脂肪杂质。

4.根据权利要求3所述的一种树鼩smscs的分离方法，其特征在于，所述混合酶消化液包括：0.2％胶原酶ⅱ+0.01％透明质酸酶ⅳ+0.005％dnase i+1％fbs+dmem/f12培养基。...

【专利技术属性】
技术研发人员：何光耀，柯盛辉，谢貌，夏巍，刘花语，罗丽莹，覃万钊，牛志杰，唐翔龙，聂镜崇，唐安洲，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：