尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒、检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒、检测方法和应用，通过物理粉碎得到的样品的粗提取物可直接用于RAA等温扩增，扩增靶标分别对应镰孢菌属真菌ITS rRNA基因的保守序列和尖孢镰孢菌细胞色素P450酶基因的特异性序列，RAA扩增产物作为DNA靶标用于CRISPR/Cas12a检测系统。本发明专利技术针对尖孢镰孢菌细胞色素P450酶基因的保守区域，其扩增靶标序列长度为120bp，所用特异性RAA引物和crRNA分别为Fo‑F/Fo‑R和Fo‑crRNA。在同一现场病原体检测反应中设置两个检测靶标和两种不同的结果读取策略的优势在于，它增强了可靠性和灵活性，使得在不同的现场条件下可以进行更准确和及时的决策。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业生物，尤其是一种尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒、检测方法和应用。

技术介绍

1、尖孢镰孢菌(fusarium oxysporum)是一种具有广泛宿主范围和高度致病性的土传病原真菌，被列为世界十大植物病原真菌之一。该菌能够侵染棉花、大豆、西瓜、香蕉、番茄和苜蓿等100多种具有重要经济价值的作物，引起枯萎病和根腐病等。其感染植物后，通常表现出萎蔫、黄化、枯萎甚至死亡的症状，严重影响作物产量和品质。目前，对尖孢镰孢菌引起的作物枯萎病、根腐病类土传病害最经济有效的防控方法是抗病品种应用，但由于该病原菌致病性分化较多，存在品种抗性缺失等问题。而采用土壤改良，土壤消毒，施用化学药剂，生防菌剂应用等防治手段都不能有效的控制该土传病害的发生。因此，正确识别尖孢镰孢菌引起的土传病害、掌握其发生流行规律、开展发病前期和初期的快速诊断，及时采取有效防治措施，对有效防治该土传病害的发生和降低生产损失具有重要的意义。为有效的监测、预警尖孢镰孢菌引起的枯萎病、根腐病等发生蔓延，建立一套灵敏度高、特异性强、便携的快速检测技术尤为重要。p>

2、镰孢菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：包括RAA引物对一：

2.根据权利要求1所述的尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：还包括构建crRNA一、crRNA二的程序和引物

3.根据权利要求1所述的尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：包括ssDNA报告分子5’-FAM-TTATT-BHQ1-TTATT-Biotin-3’。

4.根据权利要求1所述的尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：反应体系包括RAA反应体系和CRISPR/Cas12a反应体系。

5.根据权利要求4所...

【技术特征摘要】

1.一种尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：包括raa引物对一：

2.根据权利要求1所述的尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：还包括构建crrna一、crrna二的程序和引物

3.根据权利要求1所述的尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：包括ssdna报告分子5’-fam-ttatt-bhq1-ttatt-biotin-3’。

4.根据权利要求1所述的尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：反应体系包括raa反应体系和crispr/cas12a反应体系。

5.根据权利要求4所述的尖孢镰孢菌双靶标快速可视化原位检测试剂盒，其特征在于：所述raa反应体系为：重组酶、2x反应缓冲液、10μm上游引物和10μm下游引物、r...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏蘩，刘征辉，高苇，赵斌，李秀丽，贲海燕，孙萌，魏静娜，赵琳琳，赵云平，
申请(专利权)人：天津市农业科学院，
类型：发明
国别省市：