一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，涉及植物病理学技术领域，该鉴定方法包括以下步骤：S100，RNA提取与纯化：从待测芝麻样本中提取总DNA和蛋白质污染RNA，采用高效的RNA提取试剂盒，对提取的RNA进行纯化，通过去除存在的杂质和抑制剂，以保证后续反转录和PCR扩增的效率，本发明专利技术采用特定长链非编码RNA作为分子标记，该分子标记具有高度的特异性，能够准确地区分芝麻枯萎病与其他病害以及健康植株，通过数据分析，能够大大降低误判的概率，为芝麻枯萎病的准确鉴定提供了可靠的保障，同时，特定长链非编码RNA在不同环境条件下具有较好的稳定性，通过PCR扩增、高通量测序，可以在较短时间内完成大量样本的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物病理学，具体为一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法。

技术介绍

1、芝麻作为一种重要的油料作物，在全球范围内广泛种植，但是芝麻枯萎病的频繁发生给芝麻的产量和品质带来了严重威胁，芝麻枯萎病是由多种病原菌引起的病害，其发病过程复杂，早期症状不明显，一旦病情加重，往往会导致芝麻植株大面积死亡，给种植户带来巨大的经济损失，因此，准确、快速地鉴定芝麻枯萎病对于及时采取防治措施、保障芝麻生产至关重要。

2、然而，在芝麻枯萎病的鉴定方法中，传统的形态学观察和病原菌分离培养方法，在形态学观察往往依赖于经验丰富的专业人员，主观性较强，且在病害早期难以准确判断，病原菌分离培养则耗时较长，操作复杂，容易受到环境因素的干扰，而现有的基于分子标记的鉴定方法，大多采用常规的dna片段或短链rna作为分子标记，这些分子标记在特异性和灵敏度方面存在不足，与其他病害和非病害状态下的芝麻植株存在一定的交叉反应，导致误判，同时，传统的鉴定方法通常采用已知的蛋白质编码基因作为标记，这些方法往往不能精确地反映疾病的早期状态。

3、综上所述，现有的芝麻枯萎病本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，该鉴定方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述S100的具体步骤为：

3.根据权利要求2所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述S100RNA提取与纯化通过紫外分光光度计测定RNA的A260/A280比值和A260/A230比值，以评估RNA的纯度，其中，对于A260/A280比值接近2.0，A260/A230比值接近2.0-2.2时，认为RNA质量良好，将提取和纯化后的RNA储存在-80℃条件下，以防止RNA降解并为反转录和PCR扩增使...

【技术特征摘要】

1.一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，该鉴定方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述s100的具体步骤为：

3.根据权利要求2所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述s100rna提取与纯化通过紫外分光光度计测定rna的a260/a280比值和a260/a230比值，以评估rna的纯度，其中，对于a260/a280比值接近2.0，a260/a230比值接近2.0-2.2时，认为rna质量良好，将提取和纯化后的rna储存在-80℃条件下，以防止rna降解并为反转录和pcr扩增使用。

4.根据权利要求1所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述s200反转录与合成的具体步骤为：

5.根据权利要求4所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述s203反转录反应将纯化后的rna样品与特异性引物混合，并按照反转录试剂盒加入反转录酶，设置反转录反应条件为65℃，预热为5分钟以使rna变性，随后置于冰上冷却，进行反转录反应设置反应温度和时间为42℃和1小时，并70℃加热15分钟以终止反应，通过s204使用紫外分光光度计测定cdna的浓度和纯度，使cdna的a260/a280比值接近2.0，即cdna纯度较高，通过琼脂糖凝胶电泳检查cdna的质量，确保没有降解现象。

6.根据权利要求1所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述s300pcr扩增与产物检测的具体步骤为：

7.根据权利要求6所述一种基于分子标记的芝麻枯萎病鉴定方法，其特征在于，所述s303pcr扩增反应设置pcr扩增条件为94℃预变性5分钟、94℃变性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸1分钟、重复35个循环、以72℃延伸5分钟以完成终延伸，将配置好的pcr反应体系放入pcr仪中进行扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：阴长发，段灵涛，陈洪凡，王希，邓兴，黄蓉，常晓珂，兰波，杨迎青，
申请(专利权)人：江西省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：