【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种灵芝与桦褐孔菌共发酵液萃取物的制备方法及其应用。
技术介绍
1、“糖化”是在不受酶的控制下，蛋白质或脂质分子上附加糖类分子的过程。研究发现，糖化终产物在皮肤的不断累积使皮肤弹性下降，导致皮肤衰老，而皮肤衰老是身体各项因素综合的结果。晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products，ages）作为衰老的关键生物标志物之一，其在低代谢活性组织蛋白中的积累与年龄增长密切相关，这种积累会导致蛋白质结构和功能受损。有效抑制体内糖基化水平，不仅可以改善多种疾病状态，还具有延缓生物衰老的潜力。近年来，随着“抗糖”产品越来越受到市场青睐，ages的研究与开发已成为热点，目前研究和应用普遍使用的ages抑制剂氨基胍（ag）存在副作用大及适用人群受限等严重问题，亟待开发安全有效的天然ages抑制剂。
2、桦褐孔菌（ inonotus obliquus），又称桦树茸，属于多孔菌科纤孔菌属真菌，已证明具有降糖、降脂、抗肿瘤、抗病毒和抗氧化等多种功效。最新研究表明通过真菌共培养发酵技术，可有效提升其多糖、三萜、甾体、多酚和黄酮类等活性成分的含量及其生物利用度。申请人通过开展桦褐孔菌、亮菌、灵芝、桑黄、蝉花虫草等食药用真菌两两相互共培养发酵液活性筛选试验，发现灵芝与桦褐孔菌共发酵液萃取物的抗糖基化衰老活性优异，目前尚无此萃取物在抗糖化作用的相关报道。
技术实现思路
1、本专利
2、本专利技术灵芝与桦褐孔菌共发酵液萃取物的制备方法，包括如下步骤：
3、步骤1：桦褐孔菌菌丝体培养
4、1-1菌种活化：桦褐孔菌母种接种于pda固体培养基，28℃静置培养7-10天。
5、1-2液态发酵培养：从活化后的桦褐孔菌固体培养基上切取8-10块0.5 × 0.5cm2菌块，接入100 ml桦褐孔菌液态培养基中，28℃、120 r/min培养6-8天。
6、桦褐孔菌液态培养基构成：马铃薯煮液1.0 l，葡萄糖20 g/l，磷酸二氢钾3 g/l，无水硫酸镁1.5 g/l，维生素b1 0.03 g/l。马铃薯煮液具体制备过程如下：200 g去皮马铃薯块，沸水煮30 min，收集滤液定容至1.0 l。
7、步骤2：灵芝菌丝体培养
8、2-1菌种活化：灵芝母种接种于pda固体培养基，28℃静置培养7-10天。
9、2-2液态发酵培养：从活化后的灵芝固体培养基上切取8-10块0.5 × 0.5 cm2菌块，接入100 ml灵芝菌丝体液态培养基中，28℃、120 r/min培养6-8天。
10、灵芝菌丝体液态培养基构成：葡萄糖30 g/l，酵母粉3 g/l，磷酸二氢钾1.5 g/l，无水硫酸镁0.75 g/l，维生素b1 0.03 g/l。
11、步骤3：共发酵培养
12、将步骤2获得菌液加到步骤1菌液中，接种量为2-5%（w/w），28-30℃、120 r/min培养14天，收集发酵液，6000 rpm离心5-10 min，收集上清液，冷冻干燥制得共发酵液粉末。
13、步骤4：将步骤3制得的共发酵液粉末按1:10-20（g/ ml）料液比加入95 %乙醇，85℃回流提取60-120 min，过滤收集滤液。
14、步骤5：将步骤4所得滤液浓缩至原体积的1/9-1/10，6000 rpm离心，收集上清液，冷冻干燥，按1:15-20（g/ ml）料液比加入纯水超声溶解后，分级萃取，依次加入2-3倍体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇，各萃取时间为10-20 min，乙酸乙酯萃取相浓缩干燥制得乙酸乙酯萃取物（ige-e）。
15、本专利技术灵芝与桦褐孔菌共培养发酵液萃取物在抗糖基化制剂制备中的应用。
16、所述抗糖基化制剂具有优异的抗糖基化衰老功效，能够有效抑制蛋白质糖基化，显著降低晚期糖基化终末产物（ages）诱导的衰老hff细胞sa-β-gal染色阳性细胞率。
17、本专利技术的有益效果体现在：
18、1、提供了一种灵芝与桦褐孔菌共培养发酵液萃取物的制备方法，具有操作简便、成本低廉、高效能等特点。
19、2、本专利技术灵芝与桦褐孔菌共发酵液萃取物用于制备抗糖基化制剂，所述制剂抗糖基化衰老功效突出，能够显著抑制蛋白质糖基化，延缓ages诱导的hff细胞衰老。
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1.一种灵芝与桦褐孔菌共发酵液萃取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
8.权利要求1-7中任一项制备方法制得的灵芝与桦褐孔菌共发酵液萃取物在抗糖基化制剂制备中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.一种灵芝与桦褐孔菌共发酵液萃取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
5.根据权利要求1所述的制备方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈彦，吴江婷，宣开莉，陈浩，刘美春，陆永明，张文娜，潘文娟，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：
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