定点整合位点筛选方法、载体微粒、定点整合方法和微粒技术

本发明专利技术公开了一种定点整合位点筛选方法、载体微粒、定点整合方法和微粒。本发明专利技术提供了定点整合位点筛选方法、载体微粒、定点整合方法和微粒，其目的在于通过在载体微粒上整合上下游具有识别序列的标记基因，在单克隆筛选的同时进行蛋白质表达量筛选，可一步筛选得到性能良好的单克隆载体后，在表达外源目的基因时置换标记基因，极大的保证了微粒整体的稳定性，在缩短表达微粒开发的同时，保证了表达微粒整体表达性能和稳定性，由此解决现有技术表达载体开发时间较长或者性能不佳的技术问题。本发明专利技术的定点整合位点筛选方法，能有效的缩短高表达量且整体稳定的表达载体的开发周期。本发明专利技术提供的载体微粒，适应性良好，表达量和传代稳定性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，更具体地，涉及定点整合位点筛选方法、载体微粒、定点整合方法和微粒。

技术介绍

1、自1982年美国fda批准genetech的重组胰岛素上市以来，重组蛋白已经成功用于科学研究、多种疾病的诊断、治疗及预防等。目前，重组蛋白主要使用外源蛋白表达系统来进行生产和表达。用哺乳动物细胞生产重组蛋白已经成为生物技术药物表达、生产的主流技术。目前已上市、正在进行临床实验及临床前研究的生物药物，包括但不限于多肽药物、蛋白类药物，大部分都可由哺乳动物细胞进行表达，而其中，中国仓鼠卵巢(chinesehamster ovary,cho)细胞是在重组蛋白生产中最广泛使用的宿主细胞。cho细胞具有多个品系。目前用于工业生产的cho细胞系主要包括cho-k1、cho-dg44、cho-dxb11(又称cho-dukx)、cho-s及chozn(chozn zfn-modified cho cell lines)等，还有正在开发中的cho-mk。

2、中国专利技术专利(授权公告号cn100381573c)公开了一种基因组中含有可扩增的高转录活性位点的细本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种定点整合位点筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，所述标记基因与待整合的外源目的基因长度相当；

3.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，所述标记基因选自新霉素抗性基因、胸苷激酶基因、潮霉素磷酸转移酶基因、二氢叶酸还原酶基因、胸苷激酶基因、谷氨酰胺合成酶基因、天冬酰胺合成酶基因、色氨酸合成酶基因、组氨醇脱氢酶基因、氨基糖苷磷酸转移酶基因、色氨酸合成酶基因和荧光蛋白基因中的一种或者多种；和/或，

4.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，步骤(3)采用基于图像处理...

【技术特征摘要】

1.一种定点整合位点筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，所述标记基因与待整合的外源目的基因长度相当；

3.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，所述标记基因选自新霉素抗性基因、胸苷激酶基因、潮霉素磷酸转移酶基因、二氢叶酸还原酶基因、胸苷激酶基因、谷氨酰胺合成酶基因、天冬酰胺合成酶基因、色氨酸合成酶基因、组氨醇脱氢酶基因、氨基糖苷磷酸转移酶基因、色氨酸合成酶基因和荧光蛋白基因中的一种或者多种；和/或，

4.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，步骤(3)采用基于图像处理技术进行单克隆载体微粒筛选，具体方案包括但不限于深度学习目标检测模型yolo系列和ssd系列算法模型。

5.如权利要求4所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，步骤(3)所述标记基因和/或外源目的基因的表达量根据细胞图像进行智能算法预测；具体包括以下步骤：

6.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，步骤(3)采用半固体培养基单克隆载体微粒筛选。

7.如权利要求1所述的定点整合位点筛选方法，其特征在于，步骤(4)单克隆载体微粒的传代稳定性采用智能算法进行判断；具体步骤如下：

8.如权利要求1至7任一项所述定点整合位点筛选方法筛选获得的定点整合载体微粒，其特征在于，在载体微粒内源性基因上插入有外源基因；所述外源基因包括两个第一识别序列和设置在两个所述第一识别序列之间整合有用于表达标记蛋白的标记基因表达片段；

9.一种定点整合位点筛选系统，其特征在于，所述系统为电子设备和/或非暂态计算机可读存储介质；

10.一种外源目的基因定点整合方法，其特征在于，包括以下步骤：

11.如权利要求10所述的外源目的基因定点整合方法，其特征在于，所述外源目的基因表达片段设置在重组载体内，所述外源目的基因通过重组载体定点整合入所述定点...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮，林隆志，胡志鹏，张宁，杨小丽，李文峥，梁国龙，
申请(专利权)人：深圳太力生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：