【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开一般涉及免疫学、炎症和癌症治疗领域。更具体地，本公开涉及编码溶瘤病毒诸如小核糖核酸病毒(例如，柯萨奇病毒(coxsackievirus))的病毒基因组的rna多核苷酸的产生和用于此种病毒基因组表达的重组dna分子的设计。本公开还涉及增殖性病症诸如癌症的治疗和预防。
技术介绍
1、溶瘤病毒是具有复制能力的病毒，具有裂解生命周期，能够感染和裂解肿瘤细胞。直接的肿瘤细胞裂解不仅会导致细胞死亡，还会生成针对局部抗原呈递细胞摄取和呈递的肿瘤抗原的先天和适应性免疫反应。因此，溶瘤病毒通过直接细胞裂解以及通过促进能够在病毒清除后维持抗肿瘤反应的抗原特异性适应性反应来对抗肿瘤细胞生长。
2、然而，具有复制能力的病毒的临床使用面临着一些挑战。总体来说，病毒暴露会激活先天免疫通路，导致广泛的、非特异性的炎症反应。如果患者之前没有暴露于病毒，那么这种最初的先天免疫反应可能导致适应性抗病毒反应的发展和中和抗体的产生。如果患者之前暴露于病毒，那么现存的中和抗病毒抗体可能防止期望的裂解作用。在这两种情况下，中和抗体的存在不仅可以防止病毒裂解靶细胞...
【技术保护点】
1.一种重组DNA分子，所述重组DNA分子从5’至3’包含启动子序列、5’连接切割序列，以及编码包含合成RNA病毒基因组的RNA分子的多核苷酸序列，其中所述5’连接切割序列包含ENV27核酶编码序列或由其组成。
2.如权利要求1所述的重组DNA分子，其中所述ENV27核酶编码序列包含与SEQ ID NO:132(不包括其对应于SEQ ID NO:132的核苷酸49-54的P3茎插入物)具有至少80％的同一性的多核苷酸序列(不包括P3茎插入物)或由其组成。
3.如权利要求2所述的重组DNA分子，其中所述多核苷酸序列(不包括P3茎插入物)与SEQ ...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种重组dna分子，所述重组dna分子从5’至3’包含启动子序列、5’连接切割序列，以及编码包含合成rna病毒基因组的rna分子的多核苷酸序列，其中所述5’连接切割序列包含env27核酶编码序列或由其组成。
2.如权利要求1所述的重组dna分子，其中所述env27核酶编码序列包含与seq id no:132(不包括其对应于seq id no:132的核苷酸49-54的p3茎插入物)具有至少80％的同一性的多核苷酸序列(不包括p3茎插入物)或由其组成。
3.如权利要求2所述的重组dna分子，其中所述多核苷酸序列(不包括p3茎插入物)与seq id no:132(不包括其对应于seq id no:132的核苷酸49-54的p3茎插入物)相比100％同一，或具有最多1个、最多2个、最多3个、最多4个、最多5个、最多6个、最多7个、最多8个、最多9个、最多10个或最多11个突变(插入、缺失或取代)。
4.如权利要求1至3中任一项所述的重组dna分子，其中所述多核苷酸序列与seq idno:130-134中任一个相比100％同一，或具有最多1个、最多2个、最多3个、最多4个、最多5个、最多6个、最多7个、最多8个、最多9个、最多10个或最多11个突变(插入、缺失或取代)。
5.如权利要求3或4所述的重组dna分子，其中所述突变是取代。
6.如权利要求1至5中任一项所述的重组dna分子，其中所述env27核酶编码序列包含对应于seq id no:132的核苷酸25-30的位置处的多核苷酸“tttatt”或“tttgtt”。
7.如权利要求6所述的重组dna分子，其中所述env27核酶编码序列包含对应于seq idno:132的核苷酸25-30的位置处的多核苷酸“tttatt”。
8.如权利要求2至7中任一项所述的重组dna分子，其中所述env27核酶编码序列包含长度为约1-30、约1-20、约6-20或约6-10个多核苷酸的所述p3茎插入物。
9.如权利要求2至8中任一项所述的重组dna分子，其中所述p3茎插入物的长度为至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个多核苷酸。
10.如权利要求2至9中任一项所述的重组dna分子，其中所述p3茎插入物的长度为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个多核苷酸。
11.如权利要求8至10中任一项所述的重组dna分子，其中所述p3茎插入物包含对应于seq id no:132的核苷酸49-54的区域处的多核苷酸“agatct”或由其组成。
12.如权利要求8至10中任一项所述的重组dna分子，其中所述p3茎插入物包含对应于seq id no:132的核苷酸49-54的区域处的多核苷酸“agagaaatct”(seq id no:137)或由其组成。
13.如权利要求8至10中任一项所述的重组dna分子，其中所述p3茎插入物包含对应于seq id no:132的核苷酸49-54的区域处的多核苷酸“agaacgagaaatcgttct”(seq id no:138)或由其组成。
14.如权利要求1至13中任一项所述的重组dna分子，所述重组dna分子从5’至3’包含所述启动子序列、所述5’连接切割序列、编码包含所述合成rna病毒基因组的所述rna分子的所述多核苷酸序列，以及poly-a尾。
15.如权利要求14所述的重组dna分子，所述重组dna分子从5’至3’包含所述启动子序列、所述5’连接切割序列、编码包含所述合成rna病毒基因组的所述rna分子的所述多核苷酸序列、所述poly-a尾，以及3’连接切割序列。
16.如权利要求1至15中任一项所述的重组dna分子，其中所述合成rna病毒基因组编码小核糖核酸病毒。
17.如权利要求16所述的重组dna分子，其中所述小核糖核酸病毒是柯萨奇病毒。
18.如权利要求1至17中任一项所述的重组dna分子，其中所述rna病毒基因组的5’末端以“uuaaa”开头。
19.如权利要求17至18中任一项所述的重组dna分子，其中所述柯萨奇病毒是cva21毒株。
20.如权利要求19所述的重组dna分子，其中所述cva21毒株选自kuykendall毒株、ef毒株和ky毒株。
21.如权利要求1至20中任一项所述的重组dna分子，其中所述rna病毒基因组的5’末端包含与seq id no:1、5或9中任一个的核苷酸1-260具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性的多核苷酸序列。
22.如权利要求1至21中任一项所述的重组dna分子，其中所述重组dna分子在所述5’连接切割序列与编码所述rna分子的所述多核苷酸序列之间不包含额外核酸。
23.如权利要求1至22中任一项所述的重组dna分子，其中转录后所述5’连接切割序列和/或所述3’连接切割序列的切割产生所述合成rna病毒基因组的天然5’和/或3’末端。
24.如权利要求1至23中任一项所述的重组dna分子，所述重组dna分子进一步包含在所述启动子序列与所述5’连接切割序列之间的前导序列。
25.如权利要求24所述的重组dna分子，其中所述前导序列的长度小于100bp、小于90bp、小于80bp、小于70bp、小于60bp、小于50bp或小于40bp。
26.如权利要求24至25中任一项所述的重组dna分子，其中所述前导序列包含根据seqid no:135或136具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多核苷酸序列或由其组成。
27.如权利要求24至25中任一项所述的重组dna分子，其中所述前导序列包含根据seqid no:135具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多核苷酸序列或由其组成。
28.如权利要求24至27中任一项所述的重组dna分子，其中所述重组dna分子在所述启动子序列与所述前导序列之间不包含额外核酸。
29.如权利要求24至28中任一项所述的重组dna分子，其中所述重组dna分子在所述前导序列与所述5’连接切割序列之间不包含额外核酸。
30.如权利要求1至27中任一项所述的重组dna分子，其中所述启动子序列是t7启动子序列。
31.如权利要求30所述的重组dna分子，其中所述t7启动子序列包含seq id no:91或由其组成。
【专利技术属性】
技术研发人员：爱德华·M·肯尼迪，安东·阿伦科，安娜·德·阿尔梅达，杰弗瑞·大卫·布赖恩特，
申请(专利权)人：艾勒维生技公司，
类型：发明
国别省市：
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