【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，属于生物诊断研发领域。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的一些理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、人类栽培水果最终目的是获得美味的果实，香味是构成水果果实品质要素之一，浓郁的香味深受消费者喜爱。水果香味主要由一些挥发性的化合物所贡献，这些化合物种类和含量由相应的合成基因所控制。值得一提的是，果实香味物质合成基因具有明显的品种特异性，导致香味物质种类与含量在不同水果间不同，且受环境因素影响效果也有差异。例如，在低温冷藏中，柠檬烯含量在龙眼汁中有所下降，而在血橙中并未有明显变化。同样，柑橘果实中检测出高达113中香味物质，而葡萄果实则检测出100种。按照香味类型，葡萄划分为玫瑰香、草莓香和foxy三种香型。与其它两类香型葡萄相比，玫瑰香型葡萄香味特征与香味物质有明显差异，因具有浓郁的玫瑰香味而深受消费者。葡萄果实为浆果，常温不耐储运。为了延长果实的市场供应期，低温冷藏（4℃存储）是当前葡萄主要的储藏方式。在低温储藏过程中，果实品质通常会发生不同程度的下降，特别是一些香味化合物的含量会发生显著变化。市场上，通常冷藏时间越长，果实越不新鲜，消费者越不喜欢，特别是冷藏两个月及以上的果实显著影响口感。为了促进销售，部分商家会虚假标记冷藏时间，常用冷藏两个月以上的果实冒充冷藏两个月以内的果实销售。因此，研究、开发出能识别低温储藏下玫瑰香型葡萄果实冷藏时间的方法
技术实现思路
1、针对现有技术，为了开发识别冷藏时间的方法，本专利技术通过检测不同冷藏时间下果实的香味物质含量变化，筛选出未见文献报道的能识别冷藏时间的关键香味化合物，这些物质含量与冷藏时间显著负相关，通过检测这些物质含量即可识别出冷藏时间。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、在本专利技术的第一个方面，提供一种基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，该方法包括以下步骤：
4、以玫瑰香型主栽品种成熟期果实为试验材料，设置不同时间的低温储藏处理，然后分别将不同冷藏时间的果实开展香味物质检测，然后筛选出化合物含量高低与冷藏时间长短显著相关的香味化合物。
5、在本专利技术的一个或一些实施方式中，以3个典型玫瑰香型主栽品种（阳光玫瑰、巨玫瑰、87-1）成熟期果实为试验材料。玫瑰香型鲜食葡萄果实含有一些共性香味物质，也含有少量的品种特异香味物质（不存在其他品种的物质）。阳光玫瑰、巨玫瑰和87-1是已证实过的典型玫瑰香型鲜食葡萄品种。选择3个品种同时来检测、筛选共有香味物质，能有效去除各品种的特异物质。因此，筛选出的物质位玫瑰香型葡萄的共性物质，也就适用这三个品种以外的玫瑰香型葡萄。
6、在本专利技术的一个或一些实施方式中，低温冷藏处理的温度为4~8℃；优选4℃。
7、在本专利技术的一个或一些实施方式中，香味物质检测方法包括以下步骤：
8、（1）果实香味物质提取。
9、游离态香味物质：将果实的果肉和果皮分离，果皮放入浸提液，黑暗条件下振荡；过滤，离心，上清液用于果皮香味化合物检测；果肉加入抗坏血酸，粉碎，果浆离心并过滤，上清液用于果肉香味化合物检测。
10、结合态香味物质提取：果皮浸提液或果汁上清液上样通过固相小柱，分别用超纯水和二氯甲烷冲洗；甲醇洗脱，洗脱液蒸干，加入柠檬酸/磷酸缓冲液和葡萄糖苷酶溶解。
11、（2）香味物质萃取。香味物质萃取采用顶空固相微萃取（spme）技术。取 nacl、内标（2-辛醇）和步骤（1）中的浸提液加入顶空瓶。顶空瓶平衡，将萃取头插入顶空瓶萃取；萃取完成后萃取头插入gc口，热解析。
12、（3）香味物质检测的定量、定性。利用气质联用仪（gc-ms）进行定性、定量香味化合物。香味物质定性：根据全离子扫描质谱图开展化合物定性分析，利用标准品化合物的色谱保留时间和质谱信息对葡萄化合物定性分析。香味物质定量：将各类标准品化合物配置成母液连续梯度稀释不同浓度，建立香味物质的标准曲线，利用其各化合物相应的标准曲线来进行定量。
13、在本专利技术的一个或一些实施方式中，利用获取的果皮、果肉中的游离态、结合态香味物质的含量分别与冷藏时间做相关性分析，获得各品种的显著负相关的化合物；然后，筛出出同时存在玫瑰香型葡萄品种的显著负相关性化合物作为识别冷藏时间的化合物；通过检测、比对这些物质在新鲜果实和检测样品中的含量，确定便于检测（含量高，＞5μg/kg）、其含量随冷藏时间变化的物质。最后，通过检查样品和成熟新鲜果实中任一一种物质的含量，计算含量下降的幅度，实现对冷藏时间的识别。具体方法：相比成熟期果实，样品中这些物质的含量下降50%以下为冷藏2-6周果实，下降50%以上的为冷藏8周及以上的果实。例如：筛选出的物质包括果肉游离态的α-萜品醇，那么其新鲜成熟果实含量为66μg/kg，那么含量大于33μg/kg以上的为冷藏2-6周的果实，而含量低于33μg/kg为冷藏8周及以上的果实。
14、在本专利技术的第二个方面，提供一种鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的化合物，所述化合物包括果皮游离态的橙花醇、香叶醇和果肉游离态的顺-芳樟醇氧化物、橙花醚、α-萜品醇、橙花醇。首先，通过开展果实香气物质含量与冷藏时间的相关性分析，初步获得与冷藏时间显著负相关的9种物质和正相关的1种物质；其次，通过观测各种物质在3种葡萄冷藏过程中的含量及其变化，剔除含量低（小于5μg/kg）、变化不明显的4种物质，包括果皮游离态的β-紫罗兰酮和果肉游离态的2-甲基丁烯醇、(e,e)-2,4-庚二烯醛、2-辛酮。最终，获得易于定量定性检测，含量变化能表征冷藏时间的6种物质，包括果皮游离态的橙花醇、香叶醇或果肉游离态的顺-芳樟醇氧化物、橙花醚、α-萜品醇、橙花醇。
15、与本专利技术人知晓的相关技术相比，本专利技术其中的一个技术方案具有如下有益效果：
16、本专利技术可以实现、填补玫瑰香型葡萄果实冷藏时间的识别。本专利技术提供的鉴定方法是基于检测葡萄果实香味物质，检测速度快；鉴别准确率高，且仪器可以连续作业，更适合连续、实时检测，便于大规模推广应用，为葡萄冷藏时间的鉴别提供了一种客观、准确、新型的方法。
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1.一种基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，以3个典型玫瑰香型主栽品种成熟期果实为试验材料，包括阳光玫瑰、巨玫瑰、87-1。
3.如权利要求1所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，低温冷藏处理的温度为4~8℃。
4.如权利要求1所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，香味物质检测方法包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，步骤（1）的具体方法为：游离态香味物质：将果实的果肉和果皮分离，果皮放入浸提液，黑暗条件下振荡；过滤，离心，上清液用于果皮香味化合物检测；果肉加入抗坏血酸，粉碎，果浆离心并过滤，上清液用于果肉香味化合物检测。
6.如权利要求4所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，步骤（1）的具体方法为：结合态香味物质提取：果皮浸提液或果汁上清液
7. 如权利要求5或6所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，步骤（2）的具体方法为：香味物质萃取采用顶空固相微萃取（SPME）技术；取NaCl、内标和步骤（1）中的浸提液加入顶空瓶，顶空瓶平衡，将萃取头插入顶空瓶萃取；萃取完成后萃取头插入GC口，热解析。
8.如权利要求4所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，步骤（3）的具体方法为：利用气质联用仪（GC-MS）进行定性、定量香味化合物；香味物质定性：根据全离子扫描质谱图开展化合物定性分析，利用标准品化合物的色谱保留时间和质谱信息对葡萄化合物定性分析；香味物质定量：将各类标准品化合物配置成母液连续梯度稀释不同浓度，建立香味物质的标准曲线，利用其各化合物相应的标准曲线来进行定量。
9.如权利要求1所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，利用获取的果皮、果肉中的游离态、结合态香味物质的含量分别与冷藏时间做相关性分析，获得各品种的显著负相关的化合物；然后，筛出出同时存在玫瑰香型葡萄品种的显著负相关性化合物作为识别冷藏时间的化合物；通过检测、比对这些物质在新鲜果实和检测样品中的含量实现对冷藏时间的识别。
10.一种鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的化合物，其特征是，所述化合物包括果皮游离态的橙花醇、香叶醇、或果肉游离态的顺-芳樟醇氧化物、橙花醚、α-萜品醇、橙花醇。
...【技术特征摘要】
1.一种基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，以3个典型玫瑰香型主栽品种成熟期果实为试验材料，包括阳光玫瑰、巨玫瑰、87-1。
3.如权利要求1所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，低温冷藏处理的温度为4~8℃。
4.如权利要求1所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，香味物质检测方法包括以下步骤：
5.如权利要求4所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，步骤（1）的具体方法为：游离态香味物质：将果实的果肉和果皮分离，果皮放入浸提液，黑暗条件下振荡；过滤，离心，上清液用于果皮香味化合物检测；果肉加入抗坏血酸，粉碎，果浆离心并过滤，上清液用于果肉香味化合物检测。
6.如权利要求4所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷藏时间的方法，其特征是，步骤（1）的具体方法为：结合态香味物质提取：果皮浸提液或果汁上清液上样通过固相小柱，分别用超纯水和二氯甲烷冲洗；甲醇洗脱，洗脱液蒸干，加入柠檬酸/磷酸缓冲液和葡萄糖苷酶溶解。
7. 如权利要求5或6所述的基于香味物质鉴定玫瑰香型葡萄果实采后冷...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴玉森，李秀杰，李勃，王超萍，刘利，韩真，刘锴，
申请(专利权)人：山东省葡萄研究院，
类型：发明
国别省市：
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