一种以RPL4基因为内源性内部控制的BVDV核酸TaqMan-MGB RT-PCR检测系统技术方案

本发明专利技术公开了一种以RPL4基因为内源性内部控制的BVDV核酸TaqMan‑MGB RT‑PCR检测系统，包括扩增BVDV 5´‑UTR的上游引物BVDV‑F和下游引物BVDV‑R、检测BVDV 5´‑UTR扩增产物的TaqMan‑MGB探针BVDV‑P、扩增猪内参基因RPL4的上游引物RPL4‑F和下游引物RPL4‑R、检测猪内参基因RPL4扩增产物的TaqMan探针RPL4‑P，序列如SEQ ID NO.1~6所示。本发明专利技术引入了一个表达较为稳定的持家基因作为内参基因进行对目的基因检测的校正和标准化，避免现有试剂盒可能出现“假阴性”、“假阳性”的技术缺点，以提高BVDV核酸检测的准确性、灵敏度和重复性，并且可同时检测不同样品中BVDV‑1、BVDV‑2和BVDV‑3核酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种以rpl4基因为内源性内部控制的bvdv核酸taqman-mgb rt-pcr检测系统。

技术介绍

1、牛病毒性腹泻病毒(bvdv)呈全球性分布，有2个基因型，即bvdv-1与bvdv-2，和猪瘟病毒(csfv)、羊边界病毒同属于黄病毒科瘟病毒属。近年来，有研究新发现不同于bvdv-1、bvdv-2的bvdv毒株，被研究者划分为bvdv-3，由于bvdv与csfv存在广泛的交叉抗原和血清学交叉反应，临床上很难用血清学方法将其鉴别诊断。

2、荧光定量rt-pcr技术具有特异性强、敏感度高、检测范围广泛的优点，是一种重要的检测方法。现有检测bvdv核酸的荧光定量rt-pcr方法，主要用于检测bvdv-1、bvdv-2核酸，极少数用于同时检测bvdv-1、bvdv-2和bvdv-3核酸的荧光定量rt-pcr试剂盒，也因无法鉴别csfv，仅用于牛鼻拭子和粪便样品等牛源性样品检测，存在用于猪源性样品检测时可能出现“假阳性”的技术缺陷。此外，现有同时检测bvdv-1、bvdv-2和bvdv-3核酸的荧光定量rt-pcr试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种以RPL4基因为内源性内部控制的BVDV核酸TaqMan-MGB RT-PCR检测系统，其特征在于，其包括：

2. 一种以RPL4基因为内源性内部控制的BVDV核酸TaqMan-MGB RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，其包括：扩增BVDV 5´-UTR的上游引物BVDV-F和下游引物BVDV-R、检测BVDV 5´-UTR扩增产物的TaqMan-MGB探针BVDV-P、扩增猪内参基因RPL4的上游引物RPL4-F和下游引物RPL4-R、检测猪内参基因RPL4扩增产物的TaqMan探针RPL4-P，序列如下：

3. 根据权利要求2所述的一种以RPL4基因...

【技术特征摘要】

1.一种以rpl4基因为内源性内部控制的bvdv核酸taqman-mgb rt-pcr检测系统，其特征在于，其包括：

2. 一种以rpl4基因为内源性内部控制的bvdv核酸taqman-mgb rt-pcr检测试剂盒，其特征在于，其包括：扩增bvdv 5´-utr的上游引物bvdv-f和下游引物bvdv-r、检测bvdv 5´-utr扩增产物的taqman-mgb探针bvdv-p、扩增猪内参基因rpl4的上游引物rpl4-f和下游引物rpl4-r、检测猪内参基因rpl4扩增产物的taqman探针rpl4-p，序列如下：

3. 根据权利要求2所述的一种以rpl4基因为内源性内部控制的bvdv核酸taqman-mgbrt-pcr检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为一步法bvdv核酸taqman-mgb探针法检测试剂盒或两步法bvdv核酸taqman-mgb探针法检测试剂盒。

4. 根据权利要求3所述的一种以rpl4基因为内源性内部控制的bvdv核酸taqman-mgbrt-pcr检测试剂盒，其特征在于，所述的一步法bvdv核酸taqman-mgb探针法检测试剂盒至少包括以下组分：bvdv病毒液阳性对照或者bvdv重组质粒阳性对照，rpl4重组质粒，阴性对照，rt-qpcr mix，rox，上游引物bvdv-f，下游引物bvdv-r，taqman-mgb探针bvdv-p，上游引物r...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐磊，廖惠珍，张体银，陶洁，黄雅萍，杨慧，吴宏正，魏梅蕊，余勋信，曾亮明，林祚贵，朱国强，黄瑜，白泉阳，
申请(专利权)人：福建农业职业技术学院，
类型：发明
国别省市：