一种突变重组逆转录酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及基因工程、酶工程领域，具体地说涉及一种突变重组逆转录酶及其制备方法和应用；其中，本发明专利技术公开了一种突变重组逆转录酶及其制备方法和应用，所述突变重组逆转录酶包含SEQ ID NO:1～6中任一所示的氨基酸序列，该酶是通过人工合成表达载体，利用优选的宿主细胞，经IPTG诱导表达获得；经改造后的一种重组突变型逆转录酶的活性温度为37‑67℃，逆转录效率是野生型逆转录酶的65.2倍，对常见干扰物的耐受能力提高；其性能明显优于野生型M‑MLV，并在与市场化M‑MLV的性能比较中显示出优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程、酶工程领域，具体地说涉及一种突变重组逆转录酶及其制备方法和应用。

技术介绍

1、逆转录酶是分子生物学研究和应用中广泛使用的一种工具酶。它以rna为模板合成dna，是进行rna分析和检测的重要手段，在基因表达分析、基因功能研究、病原体检测、遗传病筛查等诸多领域均有广泛的使用。

2、莫罗尼鼠白血病病毒(moloney murine leukemia virus,m-mlv)逆转录酶是目前常用的逆转录酶之一，该酶是一条多肽链，包含n端聚合结构域与c端rnaseh结构域。但是该酶在应用中仍存在诸多的限制。

3、首先，m-mlv逆转录酶适宜反应温度为37～42℃，过低或过高的反应温度均会使其反应效率显著下降或失去活性。rna逆转录合成cdna程序中最大的挑战在于rna双股互补结构复杂，在相对低温时rna会形成二级结构，这种二级结构会影响转录合成cdna的效率。一般来说，可以通过提高rna逆转录反应温度来降低rna二级结构的产生。然而，普通m-mlv难以在高于55℃的温度下良好地工作。此外，较低的温度耐受也限制了它与交叉本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种突变重组逆转录酶，其特征在于，所述突变重组逆转录酶包含SEQ ID NO:1～6中任一所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的一种突变重组逆转录酶，其特征在于，所述突变重组逆转录酶为的氨基酸序列选自SEQ ID NO.4-6中任意一种。

3.根据权利要求1或2所述的一种突变重组逆转录酶，其特征在于，所述突变重组逆转录酶在55-67℃的Ct值＜19.3。

4.编码如权利要求1或2所述的一种突变重组逆转录酶的基因片段。

5.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求4所述的基因片段。

6.一种宿主细胞，其特征在于，包含权利要...

【技术特征摘要】

1.一种突变重组逆转录酶，其特征在于，所述突变重组逆转录酶包含seq id no:1～6中任一所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的一种突变重组逆转录酶，其特征在于，所述突变重组逆转录酶为的氨基酸序列选自seq id no.4-6中任意一种。

3.根据权利要求1或2所述的一种突变重组逆转录酶，其特征在于，所述突变重组逆转录酶在55-67℃的ct值＜19.3。

4.编码如权利要求1或2所述的一种突变重组逆转录酶的基因片段。

5.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求4所述的基因片段。

6.一种宿主细胞，其特征在于，包含权利要求5所述重组载体。

7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨正林，蒋黎，李霖，林元奎，冯雪，臧伟庆，周艳琼，尤其敏，林艺志，
申请(专利权)人：杭州优思达生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：