基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法技术

本发明专利技术涉多肽环化方法技术领域，具体为基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，包括：利用邻苯二甲醛(OPA)在中性或碱性条件下与无保护肽序列内的赖氨酸和半胱氨酸点击化学反应形成环肽；基于以上邻苯二甲醛(OPA)分子与含巯基及氨基的高效生物相容的反应性质，构建噬菌体环肽库；在噬菌体上展示含半胱氨酸及赖氨酸的多肽库，利用邻苯二甲醛(OPA)对多肽库进行环化，针对目标蛋白筛选出具有特异性结合的环肽配体。本发明专利技术在利用邻苯二甲醛进行多肽环化的策略中，发现其与含有半胱氨酸及赖氨酸的序列肽具有良好的反应活性，反应条件简单温和，且具有良好的生物相容性。反应体系无需加入有机溶剂或金属催化剂，适用于生物体系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉多肽环化方法，具体为基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法。

技术介绍

1、多肽类药物兼具了小分子药物和蛋白质药物的优势，具有稳定性高、易于合成、与靶标亲和力强等优点，具有良好的药理学性质，有望发展成为治疗药物。但由于线性多肽在溶液中无稳定构象，存在易被蛋白酶降解，难以跨膜及结构多样性有限等问题，限制了多肽在生物医学中的广泛应用。针对这些限制性因素，多肽的环化是经常使用的补充策略。

2、与线性肽相比，肽构象约束可减少与靶标结合的熵损失，从而提高与靶标结合的亲和力，并增强了酶促蛋白水解的稳定性，其次，环肽介于小分子和生物大分子之间，兼具二者优势，能够靶向“口袋”比较大而浅的蛋白表面。通常形成环肽都是基于半胱氨酸进行修饰，最常见的是基于半胱氨酸之间自发形成二硫键进行环化，但基于此形成的环肽易被还原发生重排反应，因此，寻找可行的生物交联分子与多肽内氨基酸残基发生偶联反应来构建环肽骨架是研究者们的主要目标。而使用tbmb进行烷基化修饰，或者其他一些基于色氨酸和酪氨酸之类残基之间的c-h活化的修饰方式都需要金属催化剂或有机溶剂，但是其不本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，其特征在于：在步骤一中，所述合成环肽的具体方法为：将含有半胱氨酸及赖氨酸的多肽粉末溶于溶剂中得到溶液A，将邻苯二甲醛粉末溶解得到溶液B，在中性或碱性缓冲溶液中，加入多肽A与硫醇还原剂，待多肽充分还原后，加入溶液B，反应得到环肽产物。

3.根据权利要求1所述的基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，其特征在于：所述含有半胱氨酸及赖氨酸的多肽的序列为KXnC，其中K代表赖氨酸，C代表半胱氨酸，Xn代表n个随机氨基酸；...

【技术特征摘要】

1.基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，其特征在于：在步骤一中，所述合成环肽的具体方法为：将含有半胱氨酸及赖氨酸的多肽粉末溶于溶剂中得到溶液a，将邻苯二甲醛粉末溶解得到溶液b，在中性或碱性缓冲溶液中，加入多肽a与硫醇还原剂，待多肽充分还原后，加入溶液b，反应得到环肽产物。

3.根据权利要求1所述的基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，其特征在于：所述含有半胱氨酸及赖氨酸的多肽的序列为kxnc，其中k代表赖氨酸，c代表半胱氨酸，xn代表n个随机氨基酸；所述溶剂可采用水、甲醇或二甲亚砜等中的一种；可将邻苯二甲醛粉末用二甲亚砜溶解得到浓度为0.5mol/l的溶液b，用水稀释至50mmol/l、5mmol/l备用；也可用磷酸盐缓冲液65℃加热溶解得到150mmol/l储液备用；所述中性或碱性缓冲溶液是ph为7-10的磷酸盐或碳酸盐缓冲溶液；可采用5mol/l三(2-羧乙基)膦盐(tcep)作为硫醇还原剂，所述硫醇还原剂中还原剂与多肽溶液a中多肽的比例≥1︰1；所述溶液b与溶液a中多肽的比例≥1︰1；所述反应的温度可为20～28℃，反应的时间可为10min～15min。

4.根据权利要求3所述的基于邻苯二甲醛构建噬菌体展示环肽库的制备方法，其特征在于：在步骤二中，基于以上邻苯二甲醛(opa)分子与含巯基及氨基的高效生物相容的反应性质，构建噬菌体环肽库...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷新响，向华，白利文，
申请(专利权)人：湖北肽环生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：