一种用于检测布鲁氏菌的引物组、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体公开了一种用于检测布鲁氏菌的引物、引物探针组、检测试剂盒及检测方法。本发明专利技术提供了一种新的检测布鲁氏菌的特异性靶基因recA，并基于recA基因保守序列设计引物和探针，由此筛选出的引物探针组能够准确检出临床样本中的布鲁氏菌，与金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌无交叉反应，特异性达100％。本发明专利技术提供的布鲁氏菌微滴数字PCR检测方法操作简单，线性范围宽，检测限低，重复性好，灵敏度高，可以检出样本中的单个拷贝，由此制备的检测试剂盒具有良好的临床应用前景和较高的经济价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种用于检测布鲁氏菌的引物、引物探针组、检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

1、布鲁氏菌(brucella)是一类革兰氏阴性的细菌，感染后会引起布鲁氏病(brucellosis)，“波状热”、“地中海热”或“马耳他热”。这种疾病会影响多种动物，包括牛、羊、山羊、猪等，并且会通过接触受感染的动物或者食用受感染的动物产品引起人类感染，也是目前最普遍的人畜共患传染病之一。

2、布鲁氏菌的检测方法主要包括细菌分离培养、血清学诊断、抗体检测(试管凝集法)和分子生物学检测(常规pcr、实时荧光定量pcr)等。其中，细菌分离培养和血清学诊断是经典的检测方法，但也存在检测周期长、操作繁琐、易漏检和潜在生物危害等问题。抗体检测用于体外定性体液中的布鲁氏菌抗体，但会存在感染初期体内没有形成抗体导致假阴性，或因免疫功能低下未产生抗体出现漏检等问题。而常规pcr方法需要凝胶电泳分析，易出现pcr产物的实验室污染，且检测灵敏度低。实时荧光定量pcr(qpcr)具有较高的灵敏度，但某些体液样本(如血液)中存在的pcr抑制剂会影响qpcr效果本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.recA基因片段的应用，其特征在于：所述应用包括但不限于以下一个或多个方面：

2.一种用于检测布鲁氏菌的引物，其特征在于：所述引物根据recA基因片段设计合成，recA基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于：所述引物包括：

4.一种用于检测布鲁氏菌的引物探针组，其特征在于：所述引物探针组包括如权利要求2或3所述的用于检测recA基因片段的引物，以及用于检测recA基因片段的探针，所述探针根据recA基因片段设计合成，recA基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。</p>

5.根据...

【技术特征摘要】

1.reca基因片段的应用，其特征在于：所述应用包括但不限于以下一个或多个方面：

2.一种用于检测布鲁氏菌的引物，其特征在于：所述引物根据reca基因片段设计合成，reca基因片段的核苷酸序列如seq id no：1所示。

3.根据权利要求2所述的引物，其特征在于：所述引物包括：

4.一种用于检测布鲁氏菌的引物探针组，其特征在于：所述引物探针组包括如权利要求2或3所述的用于检测reca基因片段的引物，以及用于检测reca基因片段的探针，所述探针根据reca基因片段设计合成，reca基因片段的核苷酸序列如seq id no：1所示。

5.根据权利要求4所述的引物探针组，其特征在于：所述探针为：

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【专利技术属性】
技术研发人员：杨思园，李冰，王凌航，王玺，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京地坛医院，
类型：发明
国别省市：