一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法技术

本发明专利技术公开了一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，包括以下几个步骤，（1）将表面改性的磁微粒与鸡抗鼠IgY抗体结合，制成R1复合物；（2）将磁珠包被的鸡抗鼠IgY抗体与目标鼠抗人IgG抗体结合，制成R2复合物；（3）将链霉亲和素化的Protein A与生物素化的碱性磷酸酶结合，形成生物素‑亲和素复合物，制成R3复合物；（4）将R3复合物与目标鼠抗人IgG抗体结合，制成R4复合物，即得。避免包被抗体和检测抗体在偶联过程中被破坏免疫活性，将包被抗体和检测抗体直接参与免疫反应，又引入生物素‑亲和素体系，大大提高检测灵敏度，适用于如阿尔茨海默病早期诊断或细胞因子风暴等低丰度疾病标志物的体外检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学免疫的，特别是涉及一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法。

技术介绍

1、化学发光技术是目前免疫诊断技术不断更新迭代后的主流方向，试剂产品具有灵敏性高、线性动力学范围宽、定量检测精确、结果稳定误差小、操作简便等优势，在临床应用中脱颖而出，成为了免疫定量分析领域的主流产品。化学发光免疫测定是公认先进的标记免疫测定技术，原理一般为将捕获抗原或抗体包被在超顺磁微粒表面，在将标记抗原或抗体吸附或共价偶联在发光化物上，此类发光物常见为碱性磷酸酶、鲁米诺、光泽精、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、三联吡啶钌等。

2、现有工艺技术中，通常使用化学交联剂进行蛋白修饰，如在羧基化磁珠包被蛋白工艺中，使用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（edc）对羧基基团进行活化，活化后具有酰胺残基与抗原或抗体的ε-氨基酸形成稳定的共价键。碱性磷酸酶标记抗原或抗体中，通常对2种蛋白进行化学修饰，使用(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯（smcc）修饰为酰胺键中间体，同时使用2-亚氨基硫烷盐酸盐（traut’s）处理抗原或抗体，修饰为具有巯基基团（-s本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，其特征在于：包括以下几个步骤，

2.根据权利要求1所述一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，其特征在于：R1组分对应的表面改性的磁微粒为羧基磁微粒，其表面修饰基团为-COOH、-NH2、或-SH基团，粒径在270nm~300nm。

3.根据权利要求2所述一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，其特征在于：磁微粒的修饰采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（EDC）化学交联剂活化磁微粒表面的羧基（COOH-），形成胺反应性O-酰基异脲中间体，用于与氨基快速反应形成酰胺键，使目标蛋白的伯氨基与活化后的O-酰基异脲中间体共价偶联。...

【技术特征摘要】

1.一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，其特征在于：包括以下几个步骤，

2.根据权利要求1所述一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，其特征在于：r1组分对应的表面改性的磁微粒为羧基磁微粒，其表面修饰基团为-cooh、-nh2、或-sh基团，粒径在270nm~300nm。

3.根据权利要求2所述一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，其特征在于：磁微粒的修饰采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺（edc）化学交联剂活化磁微粒表面的羧基（cooh-），形成胺反应性o-酰基异脲中间体，用于与氨基快速反应形成酰胺键，使目标蛋白的伯氨基与活化后的o-酰基异脲中间体共价偶联。

4.根据权利要求1所述一种磁微粒化学发光法蛋白检测方法，其特征在于：r1组分对应的第一稀释液包括na2hpo4 2h2o 7.21g/l、nah2po4 12h2o 1.31g/l、nacl 9.00g/l、procli...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊志军，孙善峰，谢望，胡静，
申请(专利权)人：安徽梅赛泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：