【技术实现步骤摘要】
本说明书涉及分子生物学领域,特别涉及一种基于核酶自剪接的无残留序列环状rna及其制备方法。
技术介绍
1、环状rna是一类广泛存在于动植物体内闭合环状的rna。近年来,随着转录组测序新技术的发展和完善,以及相应计算生物学分析方案的不断更迭,人们在真核生物中发现了多达数十万条的外显子反向剪接(或剪切)环状rna。这些环状rna可作为mirna和蛋白质的分子海绵、影响转录、干扰mrna前体的正常剪接、调控mrna分子翻译、形成环形rna蛋白质复合体、与mrna竞争性结合蛋白质等机制,参与免疫、代谢、神经系统发育和生殖等生物学过程。
2、由于环状rna具有相对稳定的结构,再加上利用诸如内部核糖体结合位点(ires)这类非帽依赖的转录起始元件,所以环状rna能够作为一种蛋白表达载体工具,直接导入到细胞中,以实现目标蛋白质的长效表达。
3、当前,体外合成环状rna的主流方案是基于i型或者ii型内含子核酶pie(permutedintron-exon)自剪切环化方案。由于其结构具有特殊性,通常需要保留内含子(intron)两
...【技术保护点】
1.一种用于制备环状RNA的DNA分子,包括从5’到3’按以下顺序可操作地连接和排列的元件:
2.如权利要求1所述的DNA分子,其特征在于,所述I型内含子由P2到P9结构域组成。
3.如权利要求2所述的DNA分子,其特征在于,所述启动子中从转录起始位点转录到所述线性RNA中的序列中从5’端到3’端的第三个碱基为G,所述启动子为T7启动子、SP6启动子和T3启动子中的一种。
4.如权利要求3所述的DNA分子,其特征在于,所述DNA分子还包括第一接头序列和第二接头序列,所述第一接头序列位于所述目标片段的3’端,所述第二接头序列位于所述目
...【技术特征摘要】
1.一种用于制备环状rna的dna分子,包括从5’到3’按以下顺序可操作地连接和排列的元件:
2.如权利要求1所述的dna分子,其特征在于,所述i型内含子由p2到p9结构域组成。
3.如权利要求2所述的dna分子,其特征在于,所述启动子中从转录起始位点转录到所述线性rna中的序列中从5’端到3’端的第三个碱基为g,所述启动子为t7启动子、sp6启动子和t3启动子中的一种。
4.如权利要求3所述的dna分子,其特征在于,所述dna分子还包括第一接头序列和第二接头序列,所述第一接头序列位于所述目标片段的3’端,所述第二接头序列位于所述目标片段的5’端;
5.如权利要求4所述的dna分子,其特征在于,所述i型内含子为ic1型,所述ic1型的i型内含子包括来自四膜虫属、肺囊虫属、脉孢菌属中的一种或多种的i型内含子。
6.如权利要求5所述的dna分子,其特征在于,所述第一接头序列的选择标准还包括:所述第一接头序列对应的rna中a和u的数量占第一接头序列的总碱基数的百分比大于第一预设值。
7.如权利要求4所述的dna分子,其特征在于,所述第一和第二接头序列的选择标准还包括:
8.如权利要求7所述的dna分子,其特征在于,所述i型内含子为ic3型,所述ic3型的i型内含子包括来自鱼腥藻属、固氮弧菌属、灰胞藻属、聚球藻属、原绿丝藻属中的一种或多种的i型内含子;或者来自玉米或烟草的i型内含子。
9.如权利要求1-8任一项所述的dna分子,其特征在于,所述目标片段包括...
【专利技术属性】
技术研发人员:戴东升,胡万辰,单琳,戴紫琳,
申请(专利权)人:优环苏州生物医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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