一种基于核酶自剪接的无残留序列环状RNA及其制备方法技术

技术编号:43542937 阅读:30 留言:0更新日期:2024-12-03 12:23
本发明专利技术公开了一种基于核酶自剪接的无残留序列环状RNA及其制备方法,属于分子生物学领域。该环状RNA由DNA分子制备而成,该DNA分子包括从5’到3’按以下顺序可操作地连接和排列的元件:启动子;poly X片段,包含大于5个相同的连续碱基;I型内含子片段;和目标片段;其中I型内含子核酶能够在一步酯交换反应中启动剪切,使得由DNA分子转录得到的线性RNA被配置为可以自环化以产生环状RNA,环状RNA只含有目标片段对应的RNA,从而避免额外使用已知可以促进剪切的内含子两端的野生型外显子残基,而不会残留外显子序列。解决了现有技术中环状RNA残留外显子的技术问题。该环状RNA可用于疾病的诊断和治疗。

【技术实现步骤摘要】

本说明书涉及分子生物学领域,特别涉及一种基于核酶自剪接的无残留序列环状rna及其制备方法。


技术介绍

1、环状rna是一类广泛存在于动植物体内闭合环状的rna。近年来,随着转录组测序新技术的发展和完善,以及相应计算生物学分析方案的不断更迭,人们在真核生物中发现了多达数十万条的外显子反向剪接(或剪切)环状rna。这些环状rna可作为mirna和蛋白质的分子海绵、影响转录、干扰mrna前体的正常剪接、调控mrna分子翻译、形成环形rna蛋白质复合体、与mrna竞争性结合蛋白质等机制,参与免疫、代谢、神经系统发育和生殖等生物学过程。

2、由于环状rna具有相对稳定的结构,再加上利用诸如内部核糖体结合位点(ires)这类非帽依赖的转录起始元件,所以环状rna能够作为一种蛋白表达载体工具,直接导入到细胞中,以实现目标蛋白质的长效表达。

3、当前,体外合成环状rna的主流方案是基于i型或者ii型内含子核酶pie(permutedintron-exon)自剪切环化方案。由于其结构具有特殊性,通常需要保留内含子(intron)两端的外显子(exon本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于制备环状RNA的DNA分子,包括从5’到3’按以下顺序可操作地连接和排列的元件:

2.如权利要求1所述的DNA分子,其特征在于,所述I型内含子由P2到P9结构域组成。

3.如权利要求2所述的DNA分子,其特征在于,所述启动子中从转录起始位点转录到所述线性RNA中的序列中从5’端到3’端的第三个碱基为G,所述启动子为T7启动子、SP6启动子和T3启动子中的一种。

4.如权利要求3所述的DNA分子,其特征在于,所述DNA分子还包括第一接头序列和第二接头序列,所述第一接头序列位于所述目标片段的3’端,所述第二接头序列位于所述目标片段的5’端;...

【技术特征摘要】

1.一种用于制备环状rna的dna分子,包括从5’到3’按以下顺序可操作地连接和排列的元件:

2.如权利要求1所述的dna分子,其特征在于,所述i型内含子由p2到p9结构域组成。

3.如权利要求2所述的dna分子,其特征在于,所述启动子中从转录起始位点转录到所述线性rna中的序列中从5’端到3’端的第三个碱基为g,所述启动子为t7启动子、sp6启动子和t3启动子中的一种。

4.如权利要求3所述的dna分子,其特征在于,所述dna分子还包括第一接头序列和第二接头序列,所述第一接头序列位于所述目标片段的3’端,所述第二接头序列位于所述目标片段的5’端;

5.如权利要求4所述的dna分子,其特征在于,所述i型内含子为ic1型,所述ic1型的i型内含子包括来自四膜虫属、肺囊虫属、脉孢菌属中的一种或多种的i型内含子。

6.如权利要求5所述的dna分子,其特征在于,所述第一接头序列的选择标准还包括:所述第一接头序列对应的rna中a和u的数量占第一接头序列的总碱基数的百分比大于第一预设值。

7.如权利要求4所述的dna分子,其特征在于,所述第一和第二接头序列的选择标准还包括:

8.如权利要求7所述的dna分子,其特征在于,所述i型内含子为ic3型,所述ic3型的i型内含子包括来自鱼腥藻属、固氮弧菌属、灰胞藻属、聚球藻属、原绿丝藻属中的一种或多种的i型内含子;或者来自玉米或烟草的i型内含子。

9.如权利要求1-8任一项所述的dna分子,其特征在于,所述目标片段包括...

【专利技术属性】
技术研发人员:戴东升胡万辰单琳戴紫琳
申请(专利权)人:优环苏州生物医药科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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