一种细胞色素P450酶突变体及其在催化甘草次酸中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种细胞色素P450酶突变体及其在催化甘草次酸中的应用，本发明专利技术以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为模板(基础)，在此氨基酸序列基础上对该细胞色素P450酶的关键活性位点进行突变改造，构建了突变体库，并筛选得到一系列催化活性和/或选择性显著提高的突变体；该突变体在生物酶催化甘草次酸制备7β‑羟基甘草次酸，降低7β‑羟基甘草次酸生产成本，高活性、高区域选择性的生成7β‑羟基甘草次酸，达到g级规模制备，有利于简化工艺过程中的分离操作，易于工程化实施，为甘草次酸的结构修饰提供更加有效的工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细胞色素p450酶突变体及其在催化甘草次酸中的应用，属于突变体领域。

技术介绍

1、甘草次酸是一种常见的五环三萜类天然产物，目前对其c3-oh、c30-cooh及不饱和烯酮位点的化学修饰，已成功获得多种具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等广泛药理活性的甘草次酸衍生物。然而，由于甘草次酸结构中大量存在惰性c-h键，传统有机合成方法难以实现惰性c-h键的高效选择性活化，化学空间有待进一步开发。

2、细胞色素p450酶在温和条件下能够高效选择性氧化多种复杂的天然产物，展示出绿色环保和高效催化的显著优势，尤其在惰性c-h键的选择性活化方面具有独特的应用潜力。细胞色素p450酶的催化依赖于高活性中间体i的生成，该中间体通过血红素中心和酶活性空腔的协同作用，实现底物惰性c-h键的选择性活化。从放线菌amycolatopsispretoriensis中分离到的细胞色素p450酶appt可以用于甘草次酸惰性c-h键选择性活化，然而，在此反应过程中，除了生成7β-羟基甘草次酸产物外，还会同时生成7β，15α-二羟基甘草次酸产物，具有较差的区域选择性，增加本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种细胞色素P450酶突变体，其特征在于，所述细胞色素P450酶突变体相对于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ApPT的突变位点为第288-291位中的任一位或几位；所述第288位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸、缬氨酸或甘氨酸；第289位的氨基酸由丝氨酸突变为谷氨酰胺；第290位的氨基酸由甘氨酸突变为谷氨酸；第291位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或半胱氨酸。

2.根据权利要求1所述细胞色素P450酶突变体，其特征在于，所述细胞色素P450酶突变体相对于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ApPT的突变位点为第291位；第...

【技术特征摘要】

1.一种细胞色素p450酶突变体，其特征在于，所述细胞色素p450酶突变体相对于氨基酸序列如seq id no.1所示的appt的突变位点为第288-291位中的任一位或几位；所述第288位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸、缬氨酸或甘氨酸；第289位的氨基酸由丝氨酸突变为谷氨酰胺；第290位的氨基酸由甘氨酸突变为谷氨酸；第291位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或半胱氨酸。

2.根据权利要求1所述细胞色素p450酶突变体，其特征在于，所述细胞色素p450酶突变体相对于氨基酸序列如seq id no.1所示的appt的突变位点为第291位；第291位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸或半胱氨酸。

3.根据权利要求1所述细胞色素p450酶突变体，其特征在于，所述细胞色素p450酶突变体相对于氨基酸序列如seq id no.1所示的appt的突变位点为第288位；所述第288位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸或缬氨酸。

4.根据权利要求1所述细胞色素p450酶突变体，其特征在于，所述细胞色素p450酶突变体相对于氨基酸序列如seq id no.1所示的appt的突变位点为第291位和第288位；所述第291位的氨基酸由苏氨酸突变为异亮氨酸；所述第288位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸或甘氨酸。

5.根据权利要求1所述细胞色素p450酶突变体，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：董廖斌，王亚鑫，张晓维，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：