一种基于芝麻原生质体的瞬时转化方法技术

本发明专利技术属于芝麻育种技术领域技术，具体涉及一种基于芝麻原生质体的瞬时转化方法。该方法包括：以芝麻幼嫩花冠组织制备原生质体、采用PEG介导法进行外源基因的瞬时转化等步骤。初步实验结果表明，采用本申请所提供的原生质制备方法后，每克鲜重组织可获得约1.108×10<supgt;7</supgt;个原生质体细胞，活性可达到86.50%；进一步的瞬时转化效率可达到60%，表现出较好的应用效果。总体上，本申请结合芝麻细胞材料特点，在对相关原生质体制备、瞬转体系等技术优化基础上，取得了较为明显的技术改进，可为芝麻遗传转化研究中的亚细胞定位、转录激活、蛋白互作和信号转导等蛋白功能解析研究奠定良好的技术基础，具有较好的技术实用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于芝麻育种技术，具体涉及一种基于芝麻原生质体的瞬时转化方法。

技术介绍

1、芝麻（ sesamum indicuml.，2n=26）是胡麻科胡麻属中一种最古老的油料作物，目前在80多个国家均有种植。但芝麻育种过程中，由于芝麻遗传基础狭窄、优异种质匮乏，因此，结合分子遗传育种等分子生物学技术是一种有效加快芝麻新品种培育的方式。

2、植物转基因实验中，基于实验目的等需要，常用转化方式包括稳转过程中常用的叶盘转化组培法、花序浸染转化法等多种，也包括基于瞬转需要的原生质体转化法（主要用于亚细胞定位、信号转导等研究）等多种。但植物原生质体制备过程中，植物细胞壁的去除常因植物种类差异、细胞壁组成成分差异等原因，使得原生质体制备质量参差不齐。

3、现有技术中，去除植物细胞壁的方法主要包括机械法、酶解法等。其中酶解法因其制备条件温和、制备原生质体数量多和活性好等原因，是主要的原生质体制备方法。但就芝麻原生质体制备而言，因为芝麻叶片和幼嫩组织往往富含多糖多酚类物质，使得常规酶解操作制备芝麻本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于芝麻原生质体的瞬时转化方法， 特征在于，该方法具体包括如下步骤：

2.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（一）中，

3.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（一）中，用MMG溶液调节芝麻原生质体细胞浓度为2×106个/mL；

4.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（二）中，孵育温度为4℃~10℃。

5.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（二）中，所述PEG-Ca2+溶液，40% PEG4000，0.2 M甘露醇和...

【技术特征摘要】

1.一种基于芝麻原生质体的瞬时转化方法， 特征在于，该方法具体包括如下步骤：

2.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（一）中，

3.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（一）中，用mmg溶液调节芝麻原生质体细胞浓度为2×106个/ml；

4.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（二）中，孵育温度为4℃~10℃。

5.如权利要求1所述基于芝麻原生质体的瞬时转化方法，其特征在于，步骤（二）中，所述peg-...

【专利技术属性】
技术研发人员：田秋珍，苗红梅，张海洋，琚铭，段迎辉，曹恒春，陈虹樵，曲文文，马琴，
申请(专利权)人：河南省农业科学院芝麻研究中心，
类型：发明
国别省市：