末端脱氧核苷酸转移酶及其突变体与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种末端脱氧核苷酸转移酶及其突变体与应用。该末端脱氧核苷酸转移酶(VuTdT‑WT)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3‑8所示。本发明专利技术比较了VuTdT‑WT与已报道的、市售的TdT酶的活性，发现VuTdT‑WT在与天然碱基作用时表现出更高的酶活性，本发明专利技术选取VuTdT‑WT为初始的酶改造起点，通过分子改造来确定酶的改造方向以及改造的确定位点，提高了TdT的催化活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种末端脱氧核苷酸转移酶及其突变体与应用。

技术介绍

1、dna合成是生命科学中最基本、应用最广泛的工具之一，也是合成生物学的关键使能技术。目前dna的亚磷酰胺固相寡核苷酸合成方法(简称亚磷酰胺法)仍然占据着主导地位。亚磷酰胺法是以二甲氧三苯甲基(dmt)为保护基的亚磷酰胺单体，通过5’→3’磷酸二酯键的合成实现相邻核苷酸的连接。然而，这种传统的化学合成方法仍存在一些挑战，如合成长度不足(一般限制在200个核苷酸以内，理论上不能超过300个核苷酸)的瓶颈问题，同时偶合效率较低、错误率较高，且涉及大量有机试剂的使用、资源浪费等。随着dna合成规模的持续快速增长，有毒化学物质的危害、成本负担和环境负担日益突出。

2、酶法寡核苷酸合成方法与化学合成相比有以下几个优点：(1)酶法合成反应是在水合、温和的条件下进行的，再加上酶的特异性，酶法合成可以减少副产物的形成和对寡核苷酸的损害，从而可以直接合成较长的寡核苷酸；(2)合成可以从天然dna(即没有保护基团的dna)开始；以及(3)蛋白质工程(如定向进化或理性蛋白质设计)可用于本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种末端脱氧核苷酸转移酶，其特征在于，所述的末端脱氧核苷酸转移酶包含有：(a)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的末端脱氧核苷酸转移酶；

2.一种权利要求1所述的末端脱氧核苷酸转移酶的编码基因。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，是将如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的第476位和/或第487位和/或第343位所示的氨基酸残基或者功能等同残基进行突变获得。

5.根据权利要求4所述的末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，所述突变...

【技术特征摘要】

1.一种末端脱氧核苷酸转移酶，其特征在于，所述的末端脱氧核苷酸转移酶包含有：(a)氨基酸序列为seq id no:1的末端脱氧核苷酸转移酶；

2.一种权利要求1所述的末端脱氧核苷酸转移酶的编码基因。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.2所示。

4.一种末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，是将如seq id no.1所示的氨基酸序列的第476位和/或第487位和/或第343位所示的氨基酸残基或者功能等同残基进行突变获得。

5.根据权利要求4所述的末端脱氧核苷酸转移酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如seq id no.3-8任一所示。

6.一种含有权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：古阳，周佳海，郑少燕，王鸿奎，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：