一种提高黄烷酮-3-羟化酶催化活性的方法及其工业化应用技术

本分案申请提供了一种提高黄烷酮‑3‑羟化酶催化活性的方法及其工业化应用，属于生物技术领域。所述的提高黄烷酮‑3‑羟化酶催化活性的方法是将野生型黄烷酮‑3‑羟化酶的保守序列的关键氨基酸突变得到的。将该突变体酶过量表达后用于催化反应，在高浓度底物的条件下具有较高的催化活性，克服了野生型酶存在的底物抑制的缺点，在黄酮类化合物的生物合成中具有良好的工业化应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种提高黄烷酮-3-羟化酶催化活性的方法及其工业化应用。

技术介绍

1、黄酮类化合物是一类重要的植物的次级代谢产物，是以2-苯基色原酮为母核而衍生的一类化合物，即以c6-c3-c6为基本碳骨架衍生而来。研究表明，黄酮类化合物具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等多种生物活性，被用于医药或保健品的生产。

2、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase，f3h)是黄酮类化合物合成过程中的一个关键酶，属于植物2-酮戊二酸依赖性双加氧酶(2-oxo-glutarate dependentdioxygenase，2-odd)家族。f3h可以催化式i所示黄烷酮生成式ii所示二氢黄酮醇：

3、

4、研究表明，不同物种间f3h基因编码的氨基酸序列和蛋白的空间结构都高度保守，含有典型的2-酮戊二酸和亚铁离子的结合结构域。随着合成生物学的发展，已经在大肠杆菌、酿酒酵母等微生物中建立了黄酮类化合物的异源表达途径。

5、然而，在现有的研究中，f3h主要在较低的底物浓度下(约0.2g/本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高黄烷酮-3-羟化酶催化活性的方法，其特征在于，所述方法是通过对野生型黄烷酮-3-羟化酶的保守序列进行定点突变得到突变体实现的；

2.权利要求1得到的黄烷酮-3-羟化酶突变体的应用，其特征在于，所述突变体用于催化黄烷酮合成二氢黄酮醇。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述催化过程包含以下步骤：

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤S3所述的黄烷酮-3-羟化酶的加入形式包括纯化后的突变体酶、含黄烷酮-3-羟化酶突变体酶的粗酶液、或者表达黄烷酮-3-羟化酶突变体的重组工程菌。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在...

【技术特征摘要】

1.一种提高黄烷酮-3-羟化酶催化活性的方法，其特征在于，所述方法是通过对野生型黄烷酮-3-羟化酶的保守序列进行定点突变得到突变体实现的；

2.权利要求1得到的黄烷酮-3-羟化酶突变体的应用，其特征在于，所述突变体用于催化黄烷酮合成二氢黄酮醇。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述催化过程包含以下步骤：

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤s3所述的黄烷酮-3-羟化酶的加入形式包括纯化后的突变体酶、含黄烷酮-3-羟化酶突变体酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金城，焦松，李禾钱，陈秋慧，
申请(专利权)人：杭州佳嘉乐生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：