一种3'mRNA测序文库的构建方法技术

技术编号:43487348 阅读:19 留言:0更新日期:2024-11-29 16:58
本发明专利技术提供一种3’mRNA测序文库的构建方法,包括以下步骤:提供目标RNA;构建逆转录体系,对目标RNA进行逆转录,得到mRNA‑cDNA杂合链;降解mRNA‑cDNA杂合链中的RNA,得到3’端带有特定接头序列的单链cDNA;构建双链合成体系,将所述单链cDNA转化为双链DNA;回收双链合成产物并以双链合成产物为模板进行PCR文库扩增,生成用于测序的双链DNA产物。本发明专利技术省去了传统全长转录本测序建库的polyT磁珠富集或核糖体RNA清除,mRNA打断,接头连接等步骤,显著简化了文库构建过程,缩短了操作时间,减少了试剂和耗材的使用量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域,具体涉及一种3’mrna测序文库的构建方法。


技术介绍

1、在过去的十年中,rna-seq已经成为全转录组范围内分析差异基因表达和mrnas差异剪接的重要工具,被应用于研究rna生物学的方方面面,包括基因表达、翻译(翻译组,translatome)、rna结构(结构组,structurome)、调节性rna、rna表观遗传学以及rna动力学等。随着下一代测序技术的革新,rna-seq技术也得到了不断发展,其应用领域也得到了不断拓展,例如空间转录学(spatialomics)等。加上近年来长读长测序和直接rna-seq(direct rna-seq)技术的应用以及数据分析计算工具的进一步整合,rna-seq技术的创新使人们对rna生物学有了更全面的理解。

2、在常规的rna-seq测序流程中,通常会包含以下几个步骤,mrna富集或去除核糖体rna(这里需要跟rna的质量以及研究方向进行相应选择,对于降解的rna样品,如rin<7的样品应选择去除核糖体rna),rna片段化,第一链cdna合成,第二链cdna合成本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种3’mRNA测序文库的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,回收双链合成产物包括:

3.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,以所述双链合成产物为模板进行PCR文库扩增包括:

4.根据权利要求1至3任一项所述的构建方法,其特征在于,所述逆转录体系包括逆转录酶和逆转录引物,所述逆转录引物包括带有Nextera Read2序列与条码序列的poly(T)VN引物接头。

5.根据权利要求1至3任一项所述的构建方法,其特征在于,所述双链合成随机引物包含Nextera Read2序列与随机序列,...

【技术特征摘要】

1.一种3’mrna测序文库的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,回收双链合成产物包括:

3.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,以所述双链合成产物为模板进行pcr文库扩增包括:

4.根据权利要求1至3任一项所述的构建方法,其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员:张鼎奇黄锦伟
申请(专利权)人:澳门科技大学
类型:发明
国别省市:

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