【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域。具体而言，本专利技术涉及一种基于perv逆转录酶的先导编辑系统，以及通过该系统进行基因编辑的方法。
技术介绍
0、专利技术背景
1、先导编辑(prime editing，pe)是近年来问世的新型基因编辑技术，可在不产生dna双链断裂的前提下实现点突变、插入、删除、替换等多种类型的编辑，克服了当前crispr/cas9和单碱基编辑技术的主要不足，是当前最为精准的基因组编辑技术。pe编辑系统由pe编辑器和先导编辑向导rna(pegrna和/或ngrna)组成。其中，pe编辑器是先导编辑的最重要组成部分，pe编辑器由cas9单切口酶(ncas9 h840a)与逆转录酶(rt)融合而成。当前效率较高且运用较为广泛的pe2及其改进版pemax编辑器，使用的是携带d200n、l603w、t330p、t306k、w313f五个突变的鼠莫洛尼氏鼠白血病病毒的逆转录酶(mmlv-rt)。
2、有团队使用其他类型的rt用于先导编辑，但其效率低于或显著低于pe2。另有报导表明，核衣壳蛋白(nc)与rt融合后...
【技术保护点】
1.一种用于靶向性修饰生物体基因组DNA序列的先导编辑系统，其包含：
2.权利要求1的先导编辑系统，其中所述PERV逆转录酶来自A型、B型或C型PERV，或来自不同型PERV的重组体，例如A/C型PERV重组体。
3.权利要求1或2的先导编辑系统，其中所述PERV是分离自巴马香猪的PERV。
4.权利要求1-3中任一项的先导编辑系统，其中所述PERV逆转录酶或其功能性变体包含SEQ ID NO:1-5之一的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:1-5之一具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少9...
【技术特征摘要】
1.一种用于靶向性修饰生物体基因组dna序列的先导编辑系统，其包含：
2.权利要求1的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶来自a型、b型或c型perv，或来自不同型perv的重组体，例如a/c型perv重组体。
3.权利要求1或2的先导编辑系统，其中所述perv是分离自巴马香猪的perv。
4.权利要求1-3中任一项的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶或其功能性变体包含seq id no:1-5之一的氨基酸序列或者与seq id no:1-5之一具有至少75％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列相同性的氨基酸序列。
5.权利要求1-4中任一项的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体缺失rnase h结构域。
6.权利要求1-5中任一项的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在选自第63位、199位、222位、305位、312位、329位、330位、331位、332位、408位或602位的一或多个位置处包含氨基酸取代。
7.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第199位、305位和312位处包含氨基酸取代。
8.权利要求7的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代d199n、t305k和w312f。
9.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第199位、305位、312位和602位处包含氨基酸取代。
10.权利要求9的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代d199n、t305k、w312f和l602w。
11.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第199位、305位、312位、329位、330位、331位和332位处包含氨基酸取代。
12.权利要求11的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代d199n、t305k、w312f、e329p、k330g、g331t和e332c。
13.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第199位、305位、312位、329位、330位、331位、332和602位处包含氨基酸取代。
14.权利要求13的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代d199n、t305k、w312f、e329p、k330g、g331t、e332c和l602w。
15.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第199位、222位、305位、312位和602位处包含氨基酸取代。
16.权利要求15的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代d199n、v222a、t305k、w312f和l602w。
17.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第63位、199位、222位、305位、312位和602位处包含氨基酸取代。
18.权利要求17的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代y63r、d199n、v222a、t305k、w312f和l602w。
19.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第199位、222位、305位、312位、408位和602位处包含氨基酸取代。
20.权利要求19的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代d199n、v222a、t305k、w312f、c408r和l602w。
21.权利要求6的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体在第63位、199位、222位、305位、312位、408位和602位处包含氨基酸取代。
22.权利要求13的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含氨基酸取代y63r、d199n、v222a、t305k、w312f、c408r和l602w。
23.权利要求1-4中任一项的先导编辑系统，其中所述perv逆转录酶的功能性变体包含seq id no:6-17或40-44之一的氨基酸序列。
24.权利要求1-23中任一项的先导编辑系统，其中在所述融合蛋白中，所述逆转录酶或其功能性变体在n端或c端与核衣壳蛋白(nc)直接地或通过接头融合。
25.权利要求24的先导编辑系...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄路生，幸宇云，刘为伟，段文鑫，高彩霞，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：
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