【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于杂交瘤细胞制备，具体涉及一种基于sa-biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法的开发及应用。
技术介绍
1、细胞融合是单克隆抗体制备的关键环节，融合好坏决定筛选的阳性克隆的比率，因此需要对细胞融合过程进行把控。目前，电融合技术已广泛应用到杂交瘤细胞生产方向。电融合是使用短而强的脉冲电场，增加细胞膜的通透性，脉冲电场在细胞膜上产生局部穿孔，从而诱导细胞融合。电融合效率比常规聚乙二醇方法高的多，可以产生更多的融合细胞。但是，由于两种异源细胞间大小存在差异，在融合池中无法保证两种异源细胞相互接触形成杂交瘤细胞，存在同源细胞相互融合的情况，导致杂交瘤融合率低及阳性率低等问题出现。
2、链霉亲和素（streptavidin, sa）是由链霉菌分泌的一种大约55 kda的蛋白，它和生物素（biotin）具有非常独特的亲和性，是自然界中最强的非共价连接之一。一种sa蛋白能够以高亲和力和选择性结合四种biotin分子，它们形成的复合物非常稳定，可以与需要偶联、固定的分子、标签或支持物连接在一起，不易解离。sa-biotin系统...
【技术保护点】
1.一种基于SA-Biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于SA-Biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法，其特征在于，步骤1）所述细胞悬液采用DPBS制备，悬液中细胞密度为1.0×107~2.5×107个/mL。
3.根据权利要求1所述的基于SA-Biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法，其特征在于，步骤1）中生物素标记反应采用Sulfo-NHS-LC-Biotin，Sulfo-NHS-LC-Biotin标记用量为35-70 μg/mL。
4.根据权利要求1所述的基于SA-B...
【技术特征摘要】
1.一种基于sa-biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于sa-biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法，其特征在于，步骤1）所述细胞悬液采用dpbs制备，悬液中细胞密度为1.0×107~2.5×107个/ml。
3.根据权利要求1所述的基于sa-biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法，其特征在于，步骤1）中生物素标记反应采用sulfo-nhs-lc-biotin，sulfo-nhs-lc-biotin标记用量为35-70 μg/ml。
4.根据权利要求1所述的基于sa-biotin桥梁的细胞标记改良电融合方法，其特征在于，步骤2）中biotin标记脾细胞的悬液中链霉亲和素的标记用量为35-70 μg/ml；链霉亲和素与生物素的质量比为1:1。
5.根据权利要求1所述的基于sa-biotin桥梁...
【专利技术属性】
技术研发人员：李红良，姚新欣，邱金平，胡爱奇，胡宇峰，
申请(专利权)人：赣南创新与转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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