一种基于RPA-CRISPR的虹鳟源性成分引物及检测体系和方法技术

本发明专利技术公开了一种基于RPA‑CRISPR的虹鳟源性成分引物及检测体系和方法。本发明专利技术所述RPA引物和crRNA具有良好的特异性，所构建的鉴别方法呈现双重特异性，对其它物种无特异性识别反应，检测结果准确可靠。同时，本发明专利技术所述虹鳟源性成分鉴别方法，操作简便，耗时少，结果准确，适用于有关监督部门对三文鱼产品中虹鳟源性成分的现场快速检测。此外，本发明专利技术所述检测方法结合快速碱裂解法提取样品核酸，在不依赖于大型仪器情况下，对三文鱼制品中掺杂的虹鳟源性成分检测限可达1%（w/w），对虹鳟基因组DNA的检测灵敏度为10<supgt;‑2</supgt; ng/μL，适用于多种三文鱼加工产品中虹鳟源性成分鉴别检测，可靠性高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品检测。更具体地，涉及一种基于rpa-crispr的虹鳟源性成分引物及检测体系和方法。

技术介绍

1、目前已有的三文鱼产品中物种鉴定方法主要分为以蛋白质和核酸为检测对象的两大类。其中，基于核酸的检测方法灵敏度高且特异性强，与基于蛋白质的检测方法对比，其更加稳定、判别准确，适合检测复杂加工肉制品，因此被广泛用于肉类物种鉴别。常见的基于核酸的物种鉴别方法包括pcr法、实时荧光pcr法、dna条形码、在pcr-rflp分析等，其中实时荧光pcr法是国内用于肉类物种鉴别的金标准。这些方法尽管灵敏度较高，但都依赖于昂贵且笨重的的变温仪器，实验操作繁琐，耗时较长，专业性要求较高，不利于有关监督部门的现场快速抽检。

2、近年来，许多dna等温扩增技术如lamp、rca、rpa等应需而生，这为现场快速核酸检测提供了可能。目前，dna等温扩增技术被广泛报道用于肉类的物种鉴别当中，例如，li等(2022)开发了一种lamp扩增结合ph指示剂的比色信号读出方法用于鉴别大西洋鲑、虹鳟和大马哈鱼，结果表明了其在控制三文鱼市场中的掺假和标签错误问题具有良好本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于鉴别虹鳟源性成分的RPA-CRISPR/Cas12a组合物，其特征在于，包括用于虹鳟源性成分快速鉴别的RPA引物O5-F/O5-R、crRNA、CRISPR/Cas12a蛋白和FQ-ssDNA荧光探针；所述RPA引物O5-F/O5-R的序列如SEQ ID NO.1～2所示，所述crRNA的序列如SEQ ID NO.3所示，所述FQ-ssDNA的序列如SEQ ID NO .4所示。

2.权利要求1所述组合物在鉴别虹鳟源性成分或制备鉴别虹鳟源性成分的产品中的应用。

3.一种快速鉴别三文鱼产品中虹鳟源性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

4....

【技术特征摘要】

1.一种用于鉴别虹鳟源性成分的rpa-crispr/cas12a组合物，其特征在于，包括用于虹鳟源性成分快速鉴别的rpa引物o5-f/o5-r、crrna、crispr/cas12a蛋白和fq-ssdna荧光探针；所述rpa引物o5-f/o5-r的序列如seq id no.1～2所示，所述crrna的序列如seq id no.3所示，所述fq-ssdna的序列如seq id no .4所示。

2.权利要求1所述组合物在鉴别虹鳟源性成分或制备鉴别虹鳟源性成分的产品中的应用。

3.一种快速鉴别三文鱼产品中虹鳟源性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：<...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈兴，李妍，雷红涛，王璋丽，黄婷婷，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：