一种组织透明化及三维染色方法和应用技术

本发明专利技术涉及组织修复与再生领域，公开了一种组织透明化及三维染色方法和应用。方法包括以下步骤：S1：将组织样品进行固定；S2：将组织样品逐步脱水后清洗；S3：将组织样品进行预处理；S4：将组织样品进行脱色；S5：将组织样品进行逐步复水；S6：将组织样品进行水化；S7：组织样品进行组织染色；S8：将组织样品孵育直到透明化，即可成像。本方法适用于人皮肤组织，在使用过程中不会导致明显的组织收缩，能够完整保留显微结构，透明化速度快且效果优异，同时不会引起荧光信号的猝灭。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组织修复与再生领域，更具体地，涉及一种组织透明化及三维染色方法和应用。

技术介绍

1、在临床实践中，全层皮肤缺损常见于创伤、烧伤和难愈性溃疡等情况。真皮支架作为诱导真皮再生模板，为治疗深度皮肤缺损提供了一种理想途径。在开发真皮支架过程中，对皮肤组织及其附属器官微观立体分布与相互空间关系进行精确解析是实现高仿生真皮支架开发所必需的。

2、然而，传统的方法，如冷冻切片，存在明显的缺点，无法观察连续的3d层面上的结构网络，工作量大且破坏神经组织，拍摄成像速度慢，一般至少需要数周。因此，建立完整的组织透明化及染色技术是必不可少的，这样可以为人皮肤重要组分的空间结构解析和定制化高仿生真皮支架的制备提供数据支持。

3、根据各透明化方法中使用的溶剂及其作用原理，现有的组织透明化方法主要分为三类：有机溶剂型、水溶剂型、水凝胶型。

4、有机溶剂型透明化方法利用高折射率的有机溶剂将不同成分的折射率均质化，以实现优良的组织透明度。例如，babb透明化方法使用乙醇脱水和四氢呋喃(thf)和二苄醚(dbe)的混合溶剂，但存在乙醇脱水本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种组织透明化及三维染色方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特征在于，所述S1中将组织样品浸泡于甲醛和聚丙烯酰胺水凝胶中进行固定；甲醛的体积浓度为3～5％，聚丙烯酰胺水凝胶的体积浓度为1～6％。

3.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特征在于，所述S8将组织样品浸泡于甲醛和聚丙烯酰胺水凝胶中孵育；甲醛的体积浓度为3～5％，聚丙烯酰胺水凝胶的体积浓度为2～8％。

4.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特征在于，所述S3将组织样品浸泡于甲醇和二氯甲烷中进行预处理；所述甲醇和二氯甲烷...

【技术特征摘要】

1.一种组织透明化及三维染色方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特征在于，所述s1中将组织样品浸泡于甲醛和聚丙烯酰胺水凝胶中进行固定；甲醛的体积浓度为3～5％，聚丙烯酰胺水凝胶的体积浓度为1～6％。

3.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特征在于，所述s8将组织样品浸泡于甲醛和聚丙烯酰胺水凝胶中孵育；甲醛的体积浓度为3～5％，聚丙烯酰胺水凝胶的体积浓度为2～8％。

4.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特征在于，所述s3将组织样品浸泡于甲醇和二氯甲烷中进行预处理；所述甲醇和二氯甲烷的体积比为1：2～4。

5.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特征在于，所述s4将组织样品在过氧化氢和甲醇中进行脱色；过氧化氢体积浓度为4～6％。

6.根据权利要求1所述组织透明化及三维染色方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：木兰，吴军，邓嘉雯，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：