【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药，特别涉及一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒及制备方法、应用。
技术介绍
1、食管癌(ec)是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，目前，手术切除，放疗，化疗，分子靶向治疗是食管癌的主要临床治疗方法，但由于治疗耐药的存在，许多ec患者无法从药物或放射治疗中获益，最终导致预后不良。尽管食管癌有许多治疗方法，但治疗食管癌仍面临巨大的挑战。因此，需要迫切研制新型的治疗食管癌的潜在候选药物。
2、核酸适配体，是从随机序列dna或rna文库中筛选而来的单链寡核苷酸，具有低分子量、低免疫原性、低毒性、高亲和力和特异性的特点。适体因这些特性而广泛应用于生物传感和生物医学领域，在癌症诊断和治疗方面发挥出了巨大的潜力。
3、在人体血浆中，白蛋白是含量最丰富的蛋白，具有组织相容性好，无免疫原性等特性。白蛋白可以与许多病变组织和细胞中过表达的受体相互作用，半衰期长等特点。蛋白质纳米颗粒具有良好的生物相容性和生物降解性、存在多个官能团可将靶向基团连接起来等优点。基于白蛋白研发的抗肿瘤药物(abraxane)，已在临床上广泛使用。目前，白蛋白已成为一种有前途的递送抗癌药物的载体。
4、从鼓槌石斛中分离得到的毛兰素具有多种药理活性，如抗炎，抗菌，抗病毒，抗肿瘤，抗视网膜病变等。近年来，越来越多的证据证明毛兰素对多种癌症具有治疗作用，其抗肿瘤机制包括诱导细胞凋亡，阻滞细胞周期，影响细胞的侵袭，迁移和血管自噬等。但是毛兰素存在水溶性差，生物利用度低，靶向性较差，导致临床转化受到阻碍。毛兰素体外具有一定的抗肿瘤活
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供了一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒及制备方法、应用，本专利技术通过as1411-白蛋白有效包载毛兰素，as1411靶向识别食管癌细胞上的核仁素，实现载药纳米粒特异性靶向食管癌细胞，减少对正常组织的毒副作用，为治疗食管癌提供了一种安全有效的治疗思路。
2、本专利技术的第一个目的在于提供一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，包括递送载体和所述递送载体负载的药物，所述药物为毛兰素，所述递送载体包括核酸适配体和白蛋白通过偶联反应制成。
3、进一步地，所述核酸适配体为as1411、egfr、her2中的一种，所述白蛋白为牛血清白蛋白或人血清白蛋白。
4、进一步地，所述毛兰素白蛋白纳米粒的粒径为100-200nm。
5、进一步地，所述毛兰素白蛋白纳米粒的载药率为11-19％，包封率为69-81％。
6、本专利技术的第二个目的在于提供一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒的制备方法，所述毛兰素白蛋白纳米粒为上述的毛兰素白蛋白纳米粒，包括：
7、将巯基修饰的核酸适配体通过接头分子与白蛋白发生偶联反应，制得递送载体，并用pbs缓冲溶液重悬，得含有递送载体的溶液；
8、将含有递送载体的溶液和毛兰素的乙醇溶液混合，制得第一混合液，随后搅拌下，加入戊二醛溶液，搅拌反应，制得毛兰素白蛋白纳米粒。
9、进一步地，所述偶联反应的具体操作如下：
10、将接头分子、白蛋白和pbs缓冲溶液混合后，在冰水浴、搅拌下反应3-6h，经离心，用pbs缓冲溶液重悬，得第二反应溶液；
11、将核酸适配体水溶液和硫醇类还原剂溶液混合，在冰浴条件、搅拌下反应20-80min，得含有巯基修饰的核酸适配体的第三反应溶液；
12、将第二反应溶液和第三反应溶液混合，在冰浴条件、搅拌下反应10-24h，离心，得递送载体，用pbs缓冲溶液重悬，得含有递送载体溶液。
13、进一步地，所述接头分子、白蛋白的质量比为2.5-3.5:40，所述第二反应溶液获得过程中搅拌速度为50-100rpm；
14、所述接头分子为4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐；
15、所述核酸适配体和硫醇类还原剂的摩尔比为1:70000-85000；
16、所述第三反应溶液获得过程中搅拌速度为50-100rpm，所述接头分子与所述核酸适配体的摩尔比为6000-7200:1。
17、进一步地，所述随后搅拌下，加入戊二醛溶液之前，还包括：
18、搅拌下，将第一混合液逐滴滴加到pbs溶液中，滴加完全后，将所得混合液继续超声混合15-30min。
19、进一步地，所述递送载体与所述毛兰素的质量比为10:1-3；搅拌反应制得毛兰素白蛋白纳米粒过程中的搅拌速度为500-700rpm，搅拌温度为30-40℃；所述戊二醛与所述核酸适配体的摩尔比为1-2:1，所述戊二醛溶液的质量浓度为0.5-1％；
20、第一混合液逐滴滴加到pbs溶液中的搅拌速度为500-700rpm，搅拌温度为30-40℃。
21、本专利技术的第三个目的在于提供上述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒在肿瘤治疗中的应用。
22、本专利技术的有益效果：
23、本专利技术提供的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒及制备方法、应用，具有以下作用效果：
24、一是，利用巯基修饰的核酸适配体通过接头分子与白蛋白发生偶联反应，生成递送载体，并利用该递送载体对毛兰素进行负载，进而提高毛兰素的溶解性和生物利用度，使毛兰素达到靶向性给药，缓控释药物的作用，用于食管癌的治疗，提高药物的疗效；
25、二是，本专利技术选用的核酸适配体(as1411、egfr、her2)，能够使递送载体能够靶向肿瘤组织，特异性识别肿瘤细胞，并与其具有高效的结合能力，使药物能够特异性的富集在肿瘤组织处，提高药物在肿瘤部位的滞留时间，延长药物的半衰期；
26、三是，本专利技术提供的制备方法所得的毛兰素白蛋白纳米粒的粒径为100-200nm，载药率为11-19％，包封率为69-81％；
27、最后，本专利技术的毛兰素白蛋白纳米粒可以制成各种治疗食管癌的制剂，可以对食管癌细胞进行靶向杀伤，对正常组织无明显损伤，减少毒副作用。
28、本专利技术的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本专利技术而了解。本专利技术的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所指出的结构来实现和获得。
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1.一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，包括递送载体和所述递送载体负载的药物，所述药物为毛兰素，所述递送载体包括核酸适配体和白蛋白通过偶联反应制成。
2.根据权利要求1所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，所述核酸适配体为AS1411、EGFR、HER2中的一种，所述白蛋白为牛血清白蛋白或人血清白蛋白。
3.根据权利要求1所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，所述毛兰素白蛋白纳米粒的粒径为100-200nm。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，所述毛兰素白蛋白纳米粒的载药率为11-19％，包封率为69-81％。
5.一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，所述毛兰素白蛋白纳米粒为权利1-4任一所述的毛兰素白蛋白纳米粒，包括：
6.根据权利要求5所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，所述偶联反应的具体操作如下：
7.根据权利要求6所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒的制备方法
8.根据权利要求5-7任一所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，所述随后搅拌下，加入戊二醛溶液之前，还包括：
9.根据权利要求8所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，所述递送载体与所述毛兰素的质量比为10:1-3；搅拌反应制得毛兰素白蛋白纳米粒过程中的搅拌速度为500-700rpm，搅拌温度为30-40℃；所述戊二醛与所述核酸适配体的摩尔比为1-2:1，所述戊二醛溶液的质量浓度为0.5-1％；
10.根据权利要求1-4任一所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒在肿瘤治疗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，包括递送载体和所述递送载体负载的药物，所述药物为毛兰素，所述递送载体包括核酸适配体和白蛋白通过偶联反应制成。
2.根据权利要求1所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，所述核酸适配体为as1411、egfr、her2中的一种，所述白蛋白为牛血清白蛋白或人血清白蛋白。
3.根据权利要求1所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，所述毛兰素白蛋白纳米粒的粒径为100-200nm。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒，其特征在于，所述毛兰素白蛋白纳米粒的载药率为11-19％，包封率为69-81％。
5.一种靶向食管癌的毛兰素白蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，所述毛兰素白蛋白纳米粒为权利1-4任一所述的毛兰素白蛋白纳米粒，包括：
6.根据权利要求5所述的一种靶向食管癌的毛兰...
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