【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药多糖领域，具体涉及一种天麻多糖及其制备方法与应用。
技术介绍
1、天麻无叶无根，属于寄生植物，与白蘑科蜜环菌共生，以蜜环菌的菌丝或菌丝分泌物为营养来源。天麻具有2000余年的药用历史，最早记载于秦汉时期的《神农草本经》。天麻富含酚类物质、天麻素、天麻多糖、蛋白质、多种氨基酸和丰富的微量元素，具有镇痛、抗抑郁、降血压、抗癫痫、抗炎、抗血栓、抗氧化、抗衰老以及改善学习记忆和微循环的作用，还具有增强细胞免疫和机体非特异性免疫的作用。
2、天麻多糖一般水溶性较差，在体内的代谢过程、作用机制等大多未知，同时天麻多糖研究的主要对象为粗多糖，缺乏成熟的纯化方法，所含天麻多糖化学结构不明确，质量难以控制。
3、中国专利cn118684790a公开了一种天麻多糖活性组分及其制备方法与应用，这种天麻多糖为均一性多糖，分子量为42.58×104da～45.28×104da，结构包括1-glcp，1,6-glcp，1,4-glcp，1,3,4-glcp和1,4,6-glcp，通过水提醇沉法，再通过脱蛋白脱色、透析处理得到，这种天麻多糖具有很好的活性，能应用于制备帕金森疾病药物或食品或保健品中。上述虽然多糖虽然为均一性多糖，但是其分子量为42.58×104da～45.28×104da，包含多种糖苷键连接方式，且通过上述制备方法得到的近似于天麻粗多糖，如何准确解析上述多糖的结构、如何有效提取和纯化上述多糖、如何评估其生物活性等都面临较大困难。
4、中国专利cn114805629a公开了天麻均一多糖及其制
5、综上所述，开发一种新的结构明确，能确定其药理活性的天麻多糖显得尤为重要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种天麻多糖及其制备方法与应用，这种多糖为tmp-ⅱa，其制备方法为，对天麻的主要成分进行水提醇沉，脱脂脱蛋白脱色，结合纤维柱色谱、凝胶过滤色谱等纯化分离，得到均一多糖tmp-ⅱa，其单糖组成为葡萄糖，分子量为960kda，分子中糖苷键连接方式为，→1)glcp(2→。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、一种天麻多糖，为均一性多糖，分子量为900-1000kda，糖苷键连接方式为→1)glcp(2→，结构式如下所示：
4、结构式中，glcp代表葡萄糖残基，-(1→以及→2)-代表糖苷键，n为5550-6165之间的正整数。
5、进一步的，所述分子量为960kda。
6、一种天麻多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
7、通过水提醇沉、脱脂脱蛋白脱色处理，得到天麻粗多糖；
8、对天麻粗多糖进行阴离子交换柱层析及葡聚糖凝胶柱层析纯化，得到天麻多糖。
9、进一步的，水提醇沉、脱脂脱蛋白脱色处理包括以下步骤：
10、取天麻，用水煎煮，过滤，得滤液，使用石油醚和sevage试剂分别萃取滤液多次，收集水溶液，水溶液与活性炭充分混匀，静置，过滤除掉活性炭，使用乙醇沉淀，得到天麻粗多糖。
11、进一步的，阴离子交换柱层析柱层析及葡聚糖凝胶柱层析纯化包括以下步骤：
12、使用deae-52阴离子交换柱对天麻粗多糖进行层析，洗脱液为0.1-0.5mol/l的nacl溶液，将层析后的多糖经透析袋透析，完成透析后冻干，再使用g-200葡聚糖凝胶柱层析进行层析，洗脱液为纯水，再经冻干得到天麻多糖。
13、优选地，使用deae-52阴离子交换柱层析过程中，nacl溶液的浓度为0.1-0.2mol/l，进一步的nacl溶液的浓度为0.1mol/l。
14、进一步的，天麻使用干燥块茎，天麻与水的体积比是1:(3-6)，煎煮温度为100℃，提取次数为1-5次。
15、优选地，水提过程中，天麻与水的体积比是1:(4-5)，煎煮后过滤的次数为2-4次；进一步的，天麻与水的体积比是1:4；煎煮后过滤的次数为3次。
16、进一步的，所述sevage试剂由氯仿及正丁醇混合得到，氯仿与正丁醇的体积比为(4-6)：1；滤液与石油醚的萃取体积比为(1-2):1，萃取次数为1-3次；滤液与sevage试剂的萃取体积比为(4-5):1，萃取次数为1-3次。
17、优选地，脱蛋白过程中，sevage试剂为氯仿和正丁醇5:1混合，滤液与石油醚的萃取体积比为1:1，滤液与sevage试剂的萃取体积比为5:1，萃取次数为3次。
18、优选地，石油醚萃取过程中，滤液与石油醚的萃取体积比为1:1，萃取次数为3次。
19、进一步的，水溶液脱色时活性炭的质量溶液比为1-2％，活性炭脱色时将水溶液升至40-50℃后充分搅拌。
20、优选地，在脱色过程中，活性炭的质量溶液比为1％，脱色时温度为50℃。
21、进一步的，所述乙醇为80％乙醇，滤液与80％乙醇体积比为1:(3-4)，醇沉温度为4-5℃，醇沉时间为10-12小时，。
22、优选地，在醇沉过程中，滤液与80％乙醇体积比为1:4，醇沉温度为4℃，醇沉时间为12小时
23、本专利技术还保护上述的天麻多糖在治疗抗衰老药物中的应用。
24、本专利技术还提供一种一种天麻多糖tmp-ⅱa的制备方法；
25、所述天麻多糖tmp-ⅱa为组成均一的多糖，其单糖组成葡萄糖。
26、天麻多糖tmp-ⅱa的分子量为960kda，为首次从金寨天麻块茎中分离获得。
27、本方法的具体步骤：将金寨天麻的干燥块茎500g，用热水煎煮，过滤，得滤液，使用石油醚和sevage试剂分别萃取滤液多次，收集水溶液，水溶液与活性炭充分混匀，静置，过滤除掉活性炭，使用80％乙醇沉淀，沉淀经冻干即为天麻粗多糖tmp。使用deae-52阴离子交换柱层析，洗脱液采用不同浓度的nacl溶液，得到2个组分(tmp-ⅰ、tmp-ⅱ)，选取tmp-ⅱ活性最佳，将此组分经2000da透析袋透析48小时，再经冻干得较纯的tmp-ⅱ。多糖tmp-ⅱ再使用g-200葡聚糖凝胶柱层析纯化，洗脱液采用纯水溶液，得到1个组分(tmp-ⅱa)，再经冻干得均一多糖tmp-ⅱa，提取率为0.26％。
28、其中，天麻样品是金寨天麻的干燥块茎。
29、其中，天麻样品与热水的体积比是1:4，热水温度为本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种天麻多糖，其特征在于，所述天麻多糖分子量为900-1000kDa，糖苷键连接方式为→1)Glcp(2→，结构式如下所示：
2.根据权利要求1所述的天麻多糖，其特征在于，所述分子量为960kDa。
3.一种权利要求1或2所述的天麻多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，水提醇沉、脱脂脱蛋白脱色处理包括以下步骤：
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，进行阴离子交换柱层析及葡聚糖凝胶柱层析纯化包括以下步骤：
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，天麻使用干燥块茎，天麻与水的体积比是1:(3-6)，用水煎煮后，过滤的次数为1-5次。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述Sevage试剂由氯仿及正丁醇混合得到，氯仿与正丁醇的体积比为(4-6)：1；滤液与石油醚的萃取体积比为(1-2):1，萃取次数为1-3次；滤液与Sevage试剂的萃取体积比为(4-5):1，萃取次数为1-3次。
8.根据权利要求4所述的制备方法，
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇为80％乙醇，滤液与80％乙醇体积比为1:(3-4)，醇沉温度为4-5℃，醇沉时间为10-12小时，所述80％乙醇为体积分数为80％的乙醇，乙醇占80％，水占20％。
10.权利要求1或2所述的天麻多糖在治疗抗衰老药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种天麻多糖，其特征在于，所述天麻多糖分子量为900-1000kda，糖苷键连接方式为→1)glcp(2→，结构式如下所示：
2.根据权利要求1所述的天麻多糖，其特征在于，所述分子量为960kda。
3.一种权利要求1或2所述的天麻多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，水提醇沉、脱脂脱蛋白脱色处理包括以下步骤：
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，进行阴离子交换柱层析及葡聚糖凝胶柱层析纯化包括以下步骤：
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，天麻使用干燥块茎，天麻与水的体积比是1:(3-6)，用水煎煮后，过滤的次数为1-5次。
7.根据权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员：王斌，朱国旗，张君婕，付然泽，张伟，
申请(专利权)人：安徽中医药大学，
类型：发明
国别省市：
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