【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及脑神经动物模型，具体为一种利用cre-loxp系统来制备scn1a+/-模型小鼠的方法，该模型小鼠可以作为dravet综合征疾病模型。
技术介绍
1、电压门控钠离子通道(voltage-gated sodium channel，vgsc)由α亚基和多个辅助β亚基共同构成，允许钠离子通过细胞膜，使可兴奋细胞产生和传导动作电位。目前已确定vgsc的α亚基有9种，即电压门控钠离子通道α1～9亚基(nav1.1～nav1.9)。钠离子通道α1亚基(sodium channelnav1.1，scn1a)基因编码nav1.1，其致病性变异可通过影响钠通道的功能导致癫痫发作。scn1a基因定位于染色体2q24.3，包含26个外显子，编码的nav1.1是一条包含2009个氨基酸的肽链跨膜镶嵌形成的三级结构，其变异所致疾病呈常染色体显性遗传。nav1.1由4个同源的跨膜结构域(dⅰ～dⅳ)组成，每个结构域包括6个相互连接的跨膜α螺旋片段(s1～s6)。第5螺旋(s5)和第6螺旋(s6)之间的连接片段呈袢状，称为孔袢(poreloop，p loop)，从细胞膜外侧进入膜内，与s5和s6跨膜螺旋片段共同构成钠离子通道的选择性孔道。每个结构域的第4螺旋片段(s4)含有携带正电荷的氨基酸残基，可感受细胞膜电位的变化，为钠通道的电压感受器。在中枢神经系统中，nav1.1主要表达于胞体和树突，也可表达在某些中间神经元的轴突起始段，对动作电位的产生和传播有十分重要的作用，且与神经系统的发育相关。目前已发现超过1900种scn1a基因变异类型(hu
2、纯合子scn1a-/-模型小鼠，胚胎致死。单纯的c57背景小鼠作为scn1a+/-模型小鼠，容易致死。单纯的129背景小鼠作为scn1a+/-模型小鼠，其表型差异不够明显，药物治疗前后，不能进行有效的判断。目前，主流scn1a+/-建模方法是利用cre-loxp系统来制备，其方法是先将c57背景scn1aflox/flox(在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的交叉(x)p1位点【locusof crossover(x)p1，loxp】的小鼠精子与129背景野生型小鼠卵细胞进行融合，获得受精卵后注射环化重组酶(cyclizationrecombinase，cre)mrna，将编辑后的受精卵移植到代孕鼠后，就可以获得f0代的50％c57/50％129的scn1a+/-模型小鼠(如图2)，f0代再进行自交，获得的f1代鼠遗传不稳定，基因会偏移，背景不清晰，模型小鼠种间表型差异很大、生存率低需要繁育2-3代才能稳定(如图3)。
技术实现思路
1、本专利技术目的在于提供一种利用cre-loxp系统来制备scn1a+/-模型小鼠的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种利用cre-loxp系统来制备scn1a+/-模型小鼠的方法，包括以下步骤；
3、s1：用100％c57背景scn1aflox/flox(在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，是含有纯合loxp的小鼠)小鼠与野生型100％129背景小鼠进行杂交，获得f1代背景理论值是50％c57/50％129的scn1aflox/+小鼠；
4、s2：在此基础上，f1代背景理论值是50％c57/50％129的scn1aflox/+小鼠与野生型100％129小鼠进行杂交，获得f2代背景理论值是25％c57/75％129的scn1aflox/+小鼠；
5、s3：在此基础上，f2代背景理论值是25％c57/75％129的scn1aflox/+小鼠与野生型100％129小鼠进行杂交，获得f3代背景理论值是12.5％c57/87.5％129的scn1aflox/+小鼠；
6、s4：在此基础上，f3代背景理论值是25％c57/75％129的scn1aflox/+小鼠与野生型100％129小鼠进行杂交，获得f4代背景理论值是6.25％c57/93.75％129的scn1aflox/+小鼠；
7、s5：scn1aflox/+小鼠重复与野生型100％129小鼠进行杂交，重复次数≥3轮；
8、s6：scn1aflox/+小鼠重复与野生型100％129小鼠进行杂交，重复3轮后，f4代背景理论值是6.25％c57/93.75％129的scn1aflox/+小鼠与100％c57背景cre小鼠进行杂交，获得背景接近为50％c57/50％129的scn1aflox/+模型小鼠。
9、优选的，所述s1中100％c57背景scn1aflox/flox的小鼠是在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，是含有纯合loxp的小鼠。
10、优选的，所述s1中scn1aflox/+(50％c57/50％129)的小鼠是在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，含有杂合loxp的小鼠，小鼠基因型背景为50％c57/50％129。
11、优选的，所述s3中scn1aflox/+(25％c57/75％129)的小鼠是在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，含有杂合loxp的小鼠，小鼠基因型背景为25％c57/75％129。
12、优选的，所述s3中scn1aflox/+(12.5％c57/87.5％129)的小鼠是在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，含有杂合loxp的小鼠，小鼠基因型背景为12.5％c57/87.5％129。
13、优选的，所述s6中scn1aflox/+(6.25％c57/93.75％129)的小鼠是在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，含有杂合loxp的小鼠，小鼠基因型背景为6.25％c57/93.75％129。
14、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
15、该方法制备的50％c57/50％129的scn1a+/-模型小鼠具有基因背景清晰、遗传稳定、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种利用Cre-loxP系统来制备Scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于，包括以下步骤；
2.根据权利要求1所述的一种利用Cre-loxP系统制备Scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述S1中100％C57背景Scn1aflox/flox的小鼠是在小鼠Scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxP位点，是含有纯合loxP的小鼠。
3.根据权利要求1所述的一种利用Cre-loxP系统制备Scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述S1中Scn1aflox/+(50％C57/50％129)的小鼠是在小鼠Scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxP位点，含有杂合loxP的小鼠，小鼠基因型背景为50％C57/50％129。
4.根据权利要求1所述的一种利用Cre-loxP系统制备Scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述S3中Scn1aflox/+(25％C57/75％129)的小鼠是在小鼠Scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxP位点，含有杂合loxP的小鼠，小鼠基因型背景为25％C57/75％129。p>
5.根据权利要求1所述的一种利用Cre-loxP系统制备Scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述S3中Scn1aflox/+(12.5％C57/87.5％129)的小鼠是在小鼠Scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxP位点，含有杂合loxP的小鼠，小鼠基因型背景为12.5％C57/87.5％129。
6.根据权利要求1所述的一种利用Cre-loxP系统制备Scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述S6中Scn1aflox/+(6.25％C57/93.75％129)的小鼠是在小鼠Scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxP位点，含有杂合loxP的小鼠，小鼠基因型背景为6.25％C57/93.75％129。
...【技术特征摘要】
1.一种利用cre-loxp系统来制备scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于，包括以下步骤；
2.根据权利要求1所述的一种利用cre-loxp系统制备scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述s1中100％c57背景scn1aflox/flox的小鼠是在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，是含有纯合loxp的小鼠。
3.根据权利要求1所述的一种利用cre-loxp系统制备scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述s1中scn1aflox/+(50％c57/50％129)的小鼠是在小鼠scn1a基因26号外显子两侧加入同方向的loxp位点，含有杂合loxp的小鼠，小鼠基因型背景为50％c57/50％129。
4.根据权利要求1所述的一种利用cre-loxp系统制备scn1a+/-模型小鼠的方法，其特征在于：所述s3中scn1aflox/+(25...
【专利技术属性】
技术研发人员：毛佳佳，陈慧慧，李长春，陈粮，
申请(专利权)人：深圳市勤业医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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