靶标识别范围广的两种基因编辑工具酶及其应用制造技术

技术编号：43373747 阅读：35 留言：0更新日期：2024-11-19 17:53

本发明专利技术公开了靶标识别范围广的两种基因编辑工具核酸内切酶及其应用，基于宏基因组学方法挖掘到新型向导RNA依赖型核酸内切酶Gs12‑11和Gs12‑13，Gs12‑11与Gs12‑13核酸酶的原间隔序列临近基序（PAM）分别为“VVYN”和“HHNN”，其中V代表A、G或C，Y代表T或C，H代表T、C或A，N代表A、T、C或G，它们的靶标识别范围大大超过PAM为“TTTV”的已知Cas12a蛋白，具有覆盖靶标位点范围更广的基因组编辑能力。本发明专利技术建立了基于CRISPR/Gs12‑11或Gs12‑13系统介导的核酸可视化检测技术，在基因组定点修饰与核酸检测领域具有广阔的应用前景。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因组编辑，具体地涉及crispr/cas12a系统中两种同源性低的核酸内切酶gs12-11与gs12-13及其介导的基因编辑技术与应用。

技术介绍

1、crispr(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是原核生物基因组内的一段重复序列，是古菌和细菌抵抗病毒等外源遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。某些细菌在遭到病毒入侵后，能够把病毒基因的一小段存储到自身的dna里一个称为crispr的存储空间。当再次遇到病毒入侵时，细菌能够根据存写的片段识别病毒，将病毒的dna切断而使之失效。

2、crispr/cas9系统是最常用的ii型crispr系统，cas9结合的靶位点必须包含原间隔邻接基序(pam)，该邻近基序在单向导rna(sgrna)结合之前通过蛋白质-dna相互作用被识别。这种pam要求对于实现精准编辑影响很大，无合适pam时导致不能进行精准的基因编辑，pam识别序列为“ngg”的活性较高的spcas9核酸酶，最早被应用于真核生物的...

【技术保护点】

1.CRISPR/Cas12a家族中的两种同源性低的核酸内切酶，其特征在于，包括以下蛋白：

2.融合蛋白，其特征在于，包含权利要求1所述蛋白和其他修饰部分。

3.分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为编码权利要求1所述核酸内切酶的多核苷酸，或编码权利要求2所述融合蛋白的多核苷酸。

4.载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述的多核苷酸。

5.一种CRISPR/Cas基因编辑系统，其特征在于，包括权利要求1所述的核酸内切酶，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体。