【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于鱼类雌核发育的，具体涉及一种由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法。
技术介绍
1、彭泽鲫(carassius auratus var.pengze)隶属鲤形目、鲤科、鲤亚科、鲫属，是一种三倍体雌核发育生殖的鱼类，具有肉味鲜美、生长快、耐低氧、抗病力强和耐长途运输等优良特点。但由于自然环境破坏导致野生彭泽鲫种群减少和近亲繁殖造成彭泽鲫种质退化，彭泽鲫的抗病力、生长速度与养殖效益逐渐降低。因此，进一步通过人工育种，培育出生长快、抗病力强的良种是当前亟待解决的问题。
2、丰产鲫，是以彭泽鲫做母本，通过雌核发育得到的一个全雌性的鲫鱼新品种。丰产鲫，外形匀称优美，与东北银鲫的体形相似，体背介于彭泽鲫和高背鲫之间，肉质较为结实，味道鲜甜，而且具有个体大、生长快、食性杂、抗病力强、群体产量高的特点；总的来说，它是鲫鱼养殖品种中综合性能最优的一个品种，在中国很多地区均有大面积的养殖。
3、然而，专利技术人却发现丰产鲫在鲫鱼养殖的高温季节，一般在5～8月，容易发生孢子虫病，且容易暴发于鱼苗时期。孢子虫病，是威胁鱼类养殖的一大寄生虫病，尤其在鲫鱼、鲤鱼的养殖中非常常见；一方面，孢子虫病难以在早期被发现，导致错过治疗时机，另一方面孢子虫寄生于鱼体组织内，且成熟孢子虫具有坚硬的外壳，普通的药物对其杀灭效果不佳；所以，一旦爆发孢子虫病，会导致丰产鲫的较高死亡率，给养殖户造成巨大的经济损失。
4、异源四倍体彭泽鲫，是彭泽鲫(♀)与兴国红鲤(♂)杂交所得的鱼种，其体质量、体长的增长速度均显著高于彭泽鲫。
5、此外，鳃出血病是危害鲫鱼养殖最为严重的一种疾病，该病暂无药可治，只能采取措施控制死亡数量，所以有必要研究抗鳃出血病的鱼种。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，得到一种具有抗孢子虫病能力的四倍体鲫鲤。
2、本专利技术采取以下技术方案实现目的。
3、一种由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，包括以下步骤：
4、(1)在以彭泽鲫为母本、兴国红鲤为父本的杂交后代中挑选四倍体彭泽鲫；
5、(2)将四倍体彭泽鲫放入亲鱼池内强化培养；
6、(3)进行强化培育后，在四倍体彭泽鲫中选取无病态、发育良好、性成熟特征明显的雌性个体作为母本亲鱼，以及选取无病态、发育良好、性成熟特征明显的雄性黑锦鲤作为父本亲鱼；对母本亲鱼和父本亲鱼进行人工催产；
7、(4)人工催产后进行人工干法授精，得到受精卵；然后进行人工孵化和鱼苗培育，得到由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤。
8、所述黑锦鲤为全身体色为黑色的锦鲤(cyprinus carpio)，具体为鲤形目(cypriniformes)、鲤科(cyprinidae)、鲤属(cyprinus)鱼类。
9、本专利技术以彭泽鲫与兴国红鲤杂交得到的四倍体彭泽鲫作为母本亲鱼、黑锦鲤作为父本亲鱼，通过异精雌核发育，得到一种具有抗孢子虫病能力的四倍体鲫鲤。本专利技术繁育得到的四倍体鲫鲤还保留了彭泽鲫及其与兴国红鲤杂交所得的四倍体彭泽鲫的肉质鲜美、生长快的优点。
10、作为本专利技术的一种具体实施方式，在步骤(1)中，从杂交后代中挑选出四倍体彭泽鲫的方法为：首先从外形上初步挑选出嘴尖，吻端像鲤鱼的子代；然后利用肾细胞染色体制备方法检测其染色体倍性，确定其是否为四倍体彭泽鲫。进一步地，还可以利用流式细胞仪测定dna含量、利用血细胞涂片法测量血细胞大小中的至少一种来判定初步挑选出的子代是否为四倍体彭泽鲫。
11、在步骤(1)中，彭泽鲫为母本亲鱼、兴国红鲤为父本亲鱼的杂交方法为本领域的常规技术，本专利技术对其没有具体限制。
12、作为本专利技术的一种具体实施方式，在步骤(2)中，即在进行人工催产前，四倍体彭泽鲫和黑锦鲤在亲鱼池内人工强化培养3～4个月，水温维持在18～23℃。
13、作为本专利技术的一种优选实施方式，在步骤(3)中，对母本亲鱼采用一针注射催产法进行人工催产，具体注射的催产药剂为促黄体释放激素a2、绒毛膜促性腺激素、地欧酮的组合药剂。作为本专利技术的具体实施方式，促黄体释放激素a2和地欧酮的注射量分别为5mg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射量为500mg/kg。本专利技术对于父本亲鱼同样采用一针注射催产法进行人工催产，催产药剂的量为母本亲鱼的一半，即，促黄体释放激素a2和地欧酮的注射量分别为2.5mg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射量为250mg/kg。
14、作为本专利技术的一种优选实施方式，在步骤(4)中，在母本亲鱼进行人工催产8～10小时后，每隔30分钟检查其的卵巢发育情况，当轻压母本亲鱼的腹部，生殖孔中有卵粒流出时，立即进行人工干法授精；人工干法授精后将受精卵放入孵化桶中，在20～25℃下进行流水孵化。
15、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
16、对本专利技术繁育得到的四倍体鲫鲤与丰产鲫置于一个大规模爆发孢子虫病的池塘中进行养殖对比实验，发现30天后，丰产鲫死亡率为80％，而本专利技术方法繁育的鲫鲤死亡率仅为5％。实验结果表明，本专利技术由黑锦鲤诱导四倍体鲫鲤雌核发育所获得的子代群体具有较强的抗孢子虫病能力。而且在养殖期间未发现本专利技术繁育得到的四倍体鲫鲤感染鳃出血病，说明其具有抗鳃出血病能力。所以，本专利技术的四倍体鲫鲤在生产应用方面具有巨大的经济价值。
17、本专利技术方法以彭泽鲫与兴国红鲤杂交得到的四倍体彭泽鲫作为母本亲鱼、黑锦鲤作为父本亲鱼进行异精雌核发育，两者适配性好，可操作性强，受精率可达72.1％，孵化率可达52.0％，出苗率可达74.7％，与丰产鲫相比生长速度大约快30％。此外，本专利技术繁育得到的四倍体鲫鲤雌核发育的子代与母本相比，具有较黑的体色，与市面上丰产鲫的体型体色相近，更有利于在市场上推广。
18、本专利技术提供一种由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，得到的鱼种性状优良、遗传稳定、生长快、受精率和孵化率高、抗孢子虫病和鳃出血病能力强，因此本专利技术对鱼类遗传育种具有重要意义。
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1.一种由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，在步骤(2)中，即在进行人工催产前，四倍体彭泽鲫和黑锦鲤在亲鱼池内人工强化培养3～4个月，水温维持在18～23℃。
3.根据权利要求2所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，在步骤(3)中，对母本亲鱼采用一针注射催产法进行人工催产，具体注射的催产药剂为促黄体释放激素A2、绒毛膜促性腺激素、地欧酮的组合药剂。
4.根据权利要求3所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，促黄体释放激素A2和地欧酮的注射量分别为5mg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射量为500mg/kg。
5.根据权利要求4所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，对于父本亲鱼同样采用一针注射催产法进行人工催产，催产药剂的量为母本亲鱼的一半。
6.根据权利要求5所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，在步骤(4)中，在母本亲鱼进行人工催产8～1
7.根据权利要求6所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，在步骤(1)中，从杂交后代中挑选出四倍体彭泽鲫的方法为：首先从外形上初步挑选出嘴尖，吻端像鲤鱼的子代；然后利用肾细胞染色体制备方法检测其染色体倍性，确定其是否为四倍体彭泽鲫。
8.根据权利要求7所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，利用流式细胞仪测定DNA含量、利用血细胞涂片法测量血细胞大小中的至少一种来判定初步挑选出的子代是否为四倍体彭泽鲫。
...【技术特征摘要】
1.一种由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，在步骤(2)中，即在进行人工催产前，四倍体彭泽鲫和黑锦鲤在亲鱼池内人工强化培养3～4个月，水温维持在18～23℃。
3.根据权利要求2所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，在步骤(3)中，对母本亲鱼采用一针注射催产法进行人工催产，具体注射的催产药剂为促黄体释放激素a2、绒毛膜促性腺激素、地欧酮的组合药剂。
4.根据权利要求3所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，促黄体释放激素a2和地欧酮的注射量分别为5mg/kg，绒毛膜促性腺激素的注射量为500mg/kg。
5.根据权利要求4所述由黑锦鲤诱导的雌核发育四倍体鲫鲤的繁育方法，其特征是，对于父本亲鱼同样采用一针注射催产法进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：张勇，廖书嘉，梁洪海，宋红光，李水生，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：
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