高表达EPO蛋白的哺乳动物细胞制造技术

本发明专利技术大体涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种高表达EPO蛋白的哺乳动物细胞。该细胞在Mast2基因的第3内含子处插入有含有一个或多个epo基因拷贝的基因表达盒，并能够稳定表达EPO蛋白。本发明专利技术提供的基因插入位点，具有表达量高，传代稳定的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术大体涉及生物，具体而言，涉及一种高表达epo蛋白的哺乳动物细胞。

技术介绍

1、促红细胞生成素（erythropoietin, epo）是主要由肾脏分泌的一种高度唾液酸化的糖蛋白类激素，作用于骨髓中红系造血祖细胞，促进其增殖、分化，提高机体血红蛋白的浓度。重组epo蛋白由中国仓鼠卵巢（chinese hamster ovary, cho）细胞表达获得，自1989年由美国安进生物工程公司开发上市以来，迅速成为世界范围内疗效最显著，销售额最高的生物工程药品。

2、cho细胞是生物制药领域广泛使用的哺乳动物表达系统，其生产的重组蛋白具有类似于人源化细胞的翻译后修饰，约70%的重组蛋白药物是由cho细胞生产的。epo重组蛋白翻译后的糖基化修饰非常关键，直接影响其在人体内的半衰期以及免疫原性。

3、传统构建外源蛋白表达细胞系的方法是将其随机插入细胞基因组中。由于整合位点及基因拷贝数的随机性，在工业生产长期传代的过程中存在拷贝数丢失等风险。由于随机整合的单克隆细胞株之间表达量存在巨大的差异，需花大量的人力、物力、时间进行单克隆细胞株的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.哺乳动物细胞，其特征在于，其在Mast2基因的第3内含子处插入有含有一个或多个epo基因拷贝的基因表达盒，并能够稳定表达EPO蛋白。

2.根据权利要求1所述的哺乳动物细胞，其特征在于，所述基因表达盒还包含选自下组的一种或多种元件：

3.根据权利要求1或2所述的哺乳动物细胞，其特征在于，所述epo基因的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，拷贝数是1个、2个、3个或更多个。

4.根据权利要求1或2所述的哺乳动物细胞，其特征在于，其为细胞株。

5.核酸构建体，其特征在于，包含顺次连接的SEQ ID NO:2所示的上游LP-同源臂、epo基...

【技术特征摘要】

1.哺乳动物细胞，其特征在于，其在mast2基因的第3内含子处插入有含有一个或多个epo基因拷贝的基因表达盒，并能够稳定表达epo蛋白。

2.根据权利要求1所述的哺乳动物细胞，其特征在于，所述基因表达盒还包含选自下组的一种或多种元件：

3.根据权利要求1或2所述的哺乳动物细胞，其特征在于，所述epo基因的氨基酸序列如seq id no:1所示，拷贝数是1个、2个、3个或更多个。

4.根据权利要求1或2所述的哺乳动物细胞，其特征在于，其为细胞株。

5.核酸构建体，其特征在于，包含顺次连接的seq id no:2所示的上游lp-同源臂、epo基因的基...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦晓红，张焱凤，米立志，郭佳，段佳宁，尚庆斌，
申请(专利权)人：天津亿普生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：