一种BaEV包膜假型慢病毒的纯化方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种BaEV包膜假型慢病毒的纯化方法。该纯化方法包括如下步骤：（1）浓缩BaEV包膜假型慢病毒澄清液，离心，弃上清，得到慢病毒沉淀；（2）将慢病毒沉淀用缓冲液重悬，加入全能核酸酶酶切，得到粗纯样品；（3）将粗纯样品经层析纯化，得到精纯样品；（4）将精纯样品进行超滤浓缩，除菌，得到纯化后的BaEV包膜假型慢病毒。利用本发明专利技术方法纯化得到的BaEV包膜假型慢病毒的感染滴度和滴度回收率明显提高，能够有效降低宿主细胞蛋白、宿主细胞DNA以及内毒素残留。本发明专利技术纯化方法在有效去除杂质的同时不影响纯化后慢病毒活性，可用于制备高滴度和高纯度的BaEV假型慢病毒产品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种baev包膜假型慢病毒的纯化方法。

技术介绍

1、慢病毒载体是一种源于人类免疫缺陷病毒的基因载体，被广泛用于真核细胞如造血干细胞和神经细胞的基因编辑。随着对基因递送工具长期深入的研究，慢病毒作为基因载体已然广泛用于基础研究和临床实践当中。随着后基因组时代的来临，基因治疗在医学研究中所占比重越来越大。一些难以根治或者缓解的传统疾病可以通过基因治疗缓解甚至治愈，慢病毒为未来基因治疗的发展提供了新的工具和方法。其中水疱性口炎病毒g蛋白(vsv-g)假型慢病毒已被广泛应用于基因治疗。但该假型慢病毒转导造血干细胞及部分淋巴细胞时，转导效率相对较低。

2、申请号为201280053749.1的专利申请公开了一种生产用突变体狒狒内源性逆转录病毒（baev）糖蛋白假型化的慢病毒载体的方法，该方法得到的baev糖蛋白假型化慢病毒载体虽然可以有效提高对造血干细胞及自然杀伤细胞的转染效率，用于制备治疗造血功能障碍或自身免疫性疾病的药物，但是该方法在假型化慢病毒载体制备过程中，baev糖蛋白极易使贴壁细胞形成合胞体，并发生脱落死亡，不仅本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种BaEV包膜假型慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述BaEV包膜假型慢病毒澄清液是将BaEV包膜假型慢病毒收获液离心后过滤所得。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述浓缩BaEV包膜假型慢病毒澄清液的方法为：在BaEV包膜假型慢病毒澄清液中加入聚乙二醇溶液混合均匀；所述BaEV包膜假型慢病毒澄清液和聚乙二醇溶液的体积比为（2-8）：1，所述聚乙二醇溶液中包含20-50% g/L聚乙二醇和0.6-1.2 M NaCl，所述聚乙二醇溶液的pH为7.5-8....

【技术特征摘要】

1.一种baev包膜假型慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述baev包膜假型慢病毒澄清液是将baev包膜假型慢病毒收获液离心后过滤所得。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述浓缩baev包膜假型慢病毒澄清液的方法为：在baev包膜假型慢病毒澄清液中加入聚乙二醇溶液混合均匀；所述baev包膜假型慢病毒澄清液和聚乙二醇溶液的体积比为（2-8）：1，所述聚乙二醇溶液中包含20-50% g/l聚乙二醇和0.6-1.2 m nacl，所述聚乙二醇溶液的ph为7.5-8.5。

4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述聚乙二醇为peg8000，所述baev包膜假型慢病毒澄清液和聚乙二醇溶液的体积比为4：1，所述聚乙二醇溶液的配制方法包括以下步骤：将聚乙二醇和nacl在缓冲液中混合，调节ph，除菌；所述聚乙二醇溶液中包含25%~45% g/l聚乙二醇和0.5~0.7 m nacl，所述聚乙二醇溶液的ph为7.5~8.0。

5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述聚乙二醇溶液中包含40% g/l聚乙二醇和0.6 m na...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵义林，余鼎，梁洪，刘东，曾金杰，
申请(专利权)人：成都蓉生药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：