一种基于重组发光菌检测污染物生物毒性的方法技术

本发明专利技术涉及微生物急性毒性测试技术领域，公开了一种基于重组发光菌检测污染物生物毒性的方法。该方法包括：(1)将重组发光菌进行菌种培养；(2)将不同浓度的污染物溶液和空白对照组分别与重组发光菌液混合，分别测定相对发光单位，计算不同浓度的污染物溶液对应的相对发光抑制率I，绘制剂量‑效应曲线，并计算IC<subgt;50</subgt;，污染物生物毒性根据IC<subgt;50</subgt;的大小进行判断；所述重组发光菌为Escherichia coli DH5αpGE‑NluxCDABE。本发明专利技术采用特定的重组发光菌进行生物毒性测试，适用重金属、有机溶剂和有机物环境样品，该重组发光菌对重金属、有机溶剂和有机物等环境样品敏感性更强，更符合生物毒性测试的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物急性毒性测试，具体涉及一种基于重组发光菌检测污染物生物毒性的方法。

技术介绍

1、按照毒性指标的不同作用特点，可将生物毒性检测技术分为急性毒性检测、亚慢性毒性检测、慢性毒性检测、内分泌干扰性检测和遗传毒性检测等，当前急性毒性检测技术应用比较广泛，可表示环境污染物与机体短时间接触后所引起的损伤，根据毒性试验受试生物的不同可划分为发光细菌毒性试验、藻类毒性试验、蚤类毒性试验、贝类毒性试验和鱼类毒性试验。其中，发光细菌法作为一种新型生物毒性检测技术，克服了传统生物毒性检测技术试验成本高、试验方法繁琐、周期长等缺点，能够快速快速、灵敏、简便且廉价检测地检测急性毒性。已经在重金属、农药、工业废水、抗生素、土壤等多种物质的生物综合毒性测试中应用广泛。于1995年，我国国家环保局(即生态环境部)公布了关于发光细菌法监测水质毒性的国家标准《水质急性毒性的测定发光细菌法(gb/t 15441-1995)》。2007年，中国石油天然气集团公司也发布了关于发光细菌法监测油田化学剂和钻井液生物毒性的企业标准《油田化学剂、钻井液生物毒性分级及检测方法发光细菌法(本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于重组发光菌检测污染物生物毒性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述相对发光抑制率I按照式(1)进行计算：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组发光菌由Escherichia coli DH5α稳转携带luxCDABE的pGENluxCDABE质粒得到。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述重金属化合物中的重金属选自金、银、铜、铁、汞、铅、锌和镉中的一种或两种以上；

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述有机物选自脂肪酮、...

【技术特征摘要】

1.一种基于重组发光菌检测污染物生物毒性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述相对发光抑制率i按照式(1)进行计算：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组发光菌由escherichia coli dh5α稳转携带luxcdabe的pgenluxcdabe质粒得到。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述重金属化合物中的重金属选自金、银、铜、铁、汞、铅、锌和镉中的一种或两种以上；

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述有机物选自脂肪酮、脂肪醇、腈、烷基亚砜、脂肪醛和酚中的一种或两种以上；

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：将重组发光菌接种于培养基中进行培养，然后进行传代培养，离心，重悬，得到重组发光菌液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述培养基含有氨苄青霉素，且所述氨苄青霉素的浓度为45～60mg/l。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述培养的条件包括：温度为20～45℃，时间为14～20h，转速为100～150rmp；

9.根据权利要求6-8中任意一项所述的方法，其特征在于，传代培养至菌液的od600值为0.2～0.4时，进行离心；

10.根据权利要求6-9中任意一项所述的方法，其特征在于，所述离心的条件包括：...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑璐，沈忱，张焱天，王曰杰，赵盛，李玲玲，张昌运，
申请(专利权)人：中国石油化工股份有限公司，
类型：发明
国别省市：