一种农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法技术

本发明专利技术提供了一种农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，包括：将含有功能基因的发根农杆菌加入至液体培养基中，制备得到侵染液；真空渗透处理的方法为：将外植体放入侵染液中进行真空渗透处理后，置于共培养培养基上进行共培养；以无菌条件下生长的常绿蓝莓苗的嫩芽作为外植体，将外植体放入侵染液中进行真空渗透处理后，置于共培养培养基上进行共培养；再将共培养后的外植体洗菌后，放置于再生培养基上进行再生培养；再生培养15d~20d后，外植体陆续长出转基因愈伤组织，并出现芽点，最终得到常绿蓝莓转基因体系。本发明专利技术首次实现了常绿蓝莓愈伤组织的转基因，并获得了转基因芽，转化率达3.27%，仅需要2‑3个月就能获得转基因芽。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物转基因dna重组，尤其涉及一种农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法。

技术介绍

1、常绿蓝莓（拉丁学名： vaccinium darrowii），杜鹃花科（ericaceae）越橘属（vaccinium）常绿灌木，是一种蓝莓野生种。与蓝莓商品种（倍性复杂）相比，常绿蓝莓在遗传学上具明显的优势：基因组简单（二倍体）、童期短（研究周期短）、且在蓝莓育种史上有重要的作用（与北方高丛蓝莓杂交培育出南方高丛蓝莓品种）。因此，常绿蓝莓被广泛用作科学研究的模式蓝莓，但是其植物组织再生困难，转基因体系一直无法建立。

2、在蓝莓转基因研究报道中，主要以多倍体蓝莓为实验材料进行外源基因的遗传转化，二倍体蓝莓还未见报道。1996年，有研究员对蓝莓品种north country进行转基因实验，获得了含gus基因的阳性植株，建立了north country的遗传转化体系（graham j, greigk, mcnicol rj. transformation of blueberry without本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，包括：

2. 如权利要求1所述的农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤（1）中，先将含有功能基因的发根农杆菌菌液于27~28℃摇床摇至浑浊，2500~3000 r离心20~25 min，弃去上清液后，再将发根农杆菌菌体加入至液体培养基中。

3.如权利要求2所述的农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤（1）中，侵染液的OD600为0.6~0.7。

4.如权利要求1所述的农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤（2）中，所述真空渗透处理的...

【技术特征摘要】

1.一种农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，包括：

2. 如权利要求1所述的农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤（1）中，先将含有功能基因的发根农杆菌菌液于27~28℃摇床摇至浑浊，2500~3000 r离心20~25 min，弃去上清液后，再将发根农杆菌菌体加入至液体培养基中。

3.如权利要求2所述的农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤（1）中，侵染液的od600为0.6~0.7。

4.如权利要求1所述的农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤（2）中，所述真空渗透处理的方法为：将外植体至于侵染液中真空浸渍2次，每次保持时间为1~2s。

5.如权利要求4所述的农杆菌介导的常绿蓝莓转基因体系的建立方法，其特征在于，步骤（2）中，所述真...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔富强，苑海迪，李晓洁，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：