【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞工程，具体涉及一种鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞的分离、鉴定和培养方法
技术介绍
1、随着经济社会发展，人类对肉类的需求越来越大，而传统肉类生产方式已经难以满足人类的需求，并且传统肉类生产方式需要消耗大量粮食、水资源和占用土地资源，还会造成严重污染环境。细胞培养肉(cultured meat)通过提取动物肌肉干细胞进行体外培养，进而分化成肌纤维。细胞培养肉涉及到干细胞的分离与纯化、干细胞的增殖与分化等过程，生产过程中仅需要培养基、一定的温度和湿度、二氧化碳等来提供营养和生长所需的环境，不会造成环境污染，不需要消耗传统肉类生产中所需要的饲料和水，并且占地面积小，节约了空间成本，是未来人造肉的主要研究发展方向。
2、鱼肉具有肉质细嫩鲜美、营养丰富的特点，是一些维生素、矿物质的良好来源。但是由于过度捕捞，鱼资源急速衰退。因此，开发鱼细胞培养技术生产细胞培养肉以满足人类需求是解决鱼资源衰退的一种手段，其中得到优异的原代细胞是细胞培养肉工厂化生产中的重要一环；鳗鱼含丰富蛋白质、维生素a、维生素d、钙、镁、硒等营养元素，营养...
【技术保护点】
1.一种鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞的分离、鉴定和培养方法，其特征在于，所述分离方法至少采用胶原酶和胰蛋白酶双酶法；所述培养方法至少将鳗鱼鱼肌卫星细胞培养在细胞培养基中，培养条件为在含有5％CO2的低温培养箱中培养；所述鉴定方法至少采用对肌卫星细胞标志蛋白进行免疫荧光染色鉴定。
2.根据权利要求1所述的一种鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞的分离、鉴定和培养方法，其特征在于，所述分离方法为浸泡至0.5～1‰次氯酸钠消毒液中半小时，随后滴入水体积0.08～0.15‰丁香酚进行麻醉，冲洗干净，置于75％酒精溶液中消毒；用手术刀取出鱼肉，置于75％酒精中二次消毒；然后用洗涤培...
【技术特征摘要】
1.一种鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞的分离、鉴定和培养方法，其特征在于，所述分离方法至少采用胶原酶和胰蛋白酶双酶法；所述培养方法至少将鳗鱼鱼肌卫星细胞培养在细胞培养基中，培养条件为在含有5％co2的低温培养箱中培养；所述鉴定方法至少采用对肌卫星细胞标志蛋白进行免疫荧光染色鉴定。
2.根据权利要求1所述的一种鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞的分离、鉴定和培养方法，其特征在于，所述分离方法为浸泡至0.5～1‰次氯酸钠消毒液中半小时，随后滴入水体积0.08～0.15‰丁香酚进行麻醉，冲洗干净，置于75％酒精溶液中消毒；用手术刀取出鱼肉，置于75％酒精中二次消毒；然后用洗涤培养基冲洗至少3次，粉碎；胶原酶和胰蛋白酶双酶法消化并分离去上清液，过筛最终得到鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞。
3.根据权利要求1或2所述的一种鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞的分离、鉴定和培养方法，其特征在于，所述胶原酶为i型或iv型胶原酶，胶原酶浓度为0.05％～0.5％；所述胰蛋白酶浓度为0.05％～0.5％。
4.根据权利要求2所述的一种鳗鱼鱼肌卫星细胞原代细胞的分离、鉴定和培养方法，其特征在于，所述粉碎为将鱼肉转移至已灭菌的绞肉机中，...
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