一种产异淀粉酶重组菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种产异淀粉酶重组菌及其构建方法和应用。本发明专利技术基于枯草芽孢杆菌设计全新的遗传改造策略，在枯草芽孢杆菌中敲除amyE、amyL、srfC和spoIIAC基因，同时利用信号肽介导分泌表达外源异淀粉酶，实现利用枯草芽孢杆菌高效生产异淀粉酶；此外，通过对异淀粉酶编码基因进行优化以及设计特定的信号肽，能够进一步提高异淀粉酶的表达，摇瓶发酵培养胞外酶活可达24.3U·mL<supgt;‑1</supgt;以上，为异淀粉酶的放大生产奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及一种产异淀粉酶重组菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、异淀粉酶(ec 3.2.1.68)是淀粉脱支酶的一种，它可以水解糖原、支链淀粉和β-极限糊精中α-1,6糖苷键，对α-极限糊精具有部分水解作用，但不能水解普鲁兰多糖。异淀粉酶在淀粉加工工业中具有重要的应用价值，可以与糖化酶、β-淀粉酶、cgt酶、4-α-葡聚糖转移酶等淀粉酶复配生产葡萄糖、麦芽糖、环糊精、抗性淀粉等产品，缩短反应时间，提高淀粉的转化率，降低其它糖化用酶制剂的使用量，从而达到增加产量、提高设备利用率、降低生产成本的目的。尽管异淀粉酶在工业上的应用范围越来越广，但是，迄今为止仅主要有来源于假单胞菌pseudomonas amyloderamosa的异淀粉酶实现了工业化生产。

2、中国作为全球重要的异淀粉酶市场，近年来行业供应量和需求量均呈现上升趋势。关于异淀粉酶的研究主要集中于菌株筛选、诱变改良、酶分离纯化以及酶学定性等。如有研究报道以t.fusca基因组dna为模板，通过pcr克隆得到了异淀粉酶编码基因，构建得到了产重组异淀粉酶的大肠杆菌，并优化了本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述重组菌以枯草芽孢杆菌为宿主，表达异淀粉酶，所述异淀粉酶还融合有信号肽，所述重组菌缺失amyE、amyL、srfC和spoIIAC基因。

2.根据权利要求1所述的产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述异淀粉酶的编码基因的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列；

3.根据权利要求1或2所述的产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述信号肽包括sacBss信号肽、ywtF信号肽或phrK信号肽中至少一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌B.subtilis ...

【技术特征摘要】

1.一种产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述重组菌以枯草芽孢杆菌为宿主，表达异淀粉酶，所述异淀粉酶还融合有信号肽，所述重组菌缺失amye、amyl、srfc和spoiiac基因。

2.根据权利要求1所述的产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述异淀粉酶的编码基因的核酸序列包括seq id no.1所示的序列；

3.根据权利要求1或2所述的产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述信号肽包括sacbss信号肽、ywtf信号肽或phrk信号肽中至少一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的产异淀粉酶重组菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌b.subtilis atcc 6051a。

5.用于在权利要求1-4任一项所述的产异淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘翔，张劲楠，唐谋，田淑芳，周伟，
申请(专利权)人：江苏省奥谷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：