【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及用于鉴定、表征和去除宿主细胞蛋白的方法。
技术介绍
1、生物治疗产品中的高分子量(hmw)聚集体在药物开发、商业制造以及产品在整个储存期限内的产品稳定性方面带来了挑战。hmw聚集体可能在制造、调配和装运或递送给患者期间形成。生物治疗产品中hmw聚集体的存在可能会影响药物功效，并增加患者的不良免疫应答的风险。因此，将生物治疗产品中的hmw物种的水平作为关键质量属性进行监测。
2、hmw物种在生物治疗剂中的不良影响的另外的潜在机制是存在宿主细胞蛋白(hcp)。残余的宿主细胞蛋白(hcp)的存在可能会引起生物制药产品的潜在安全风险和制造的问题。由于重组dna技术已广泛用于在宿主细胞中产生生物制药产品，因此有必要去除杂质以获得具有高纯度的生物制药产品。在进行临床研究之前，进行纯化生物处理之后的任何残余杂质应以可接受地低的水平存在。具体地，源自哺乳动物表达系统(例如，中国仓鼠卵巢(cho)细胞)的残余hcp可能危及产品安全性、质量和稳定性。即使痕量的特定hcp有时也可能引起免疫原性应答或不令人期望的修饰。因此，需要监测药物产...
【技术保护点】
1.一种用于鉴定样品中的宿主细胞蛋白(HCP)杂质的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种所关注的蛋白质为抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、融合蛋白、抗体-药物缀合物、抗体片段或蛋白质药物产品。
3.根据权利要求1所述的方法，其中上样到所述SEC柱上的蛋白质的量介于约0.5mg与约20mg之间、介于约1mg与约10mg之间、介于约8mg与约12mg之间，为约1mg、约5mg、约10mg或约20mg。
4.根据权利要求3所述的方法，其中上样到所述SEC柱上的蛋白质的量为约10mg。
5.根据权利...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于鉴定样品中的宿主细胞蛋白(hcp)杂质的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种所关注的蛋白质为抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、融合蛋白、抗体-药物缀合物、抗体片段或蛋白质药物产品。
3.根据权利要求1所述的方法，其中上样到所述sec柱上的蛋白质的量介于约0.5mg与约20mg之间、介于约1mg与约10mg之间、介于约8mg与约12mg之间，为约1mg、约5mg、约10mg或约20mg。
4.根据权利要求3所述的方法，其中上样到所述sec柱上的蛋白质的量为约10mg。
5.根据权利要求1所述的方法，其中用于所述sec分析的流动相包括约10mm的磷酸盐和约150mm的nacl。
6.根据权利要求1所述的方法，其中用于所述sec分析的流动相为变性流动相。
7.根据权利要求1所述的方法，其中用于所述sec分析的流动相为非变性流动相。
8.根据权利要求6所述的方法，其中所述流动相包括乙腈，任选地其中所述乙腈的浓度介于约5％v/v与约20％v/v之间、介于约10％v/v与约20％v/v之间、介于约15％v/v与约20％v/v之间，为约5％v/v、约10％v/v、约15％v/v或约20％v/v。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述乙腈的浓度为约20％v/v。
10.根据权利要求6所述的方法，其中所述流动相包括至少一种表面活性剂，任选地其中所述至少一种表面活性剂的浓度介于约6mm与约36mm之间，为约12mm、约24mm或约40mm。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述至少一种表面活性剂为洗涤剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述至少一种洗涤剂选自由脱氧胆酸钠、月桂酰肌氨酸钠以及其组合组成的组。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述至少一种洗涤剂为脱氧胆酸钠和月桂酰肌氨酸钠，其中脱氧胆酸钠的浓度为约12mm，并且月桂酰肌氨酸钠的浓度为约12mm。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述级分包括高分子量(hmw)级分、主级分和低分子量(lmw)级分。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述级分进一步包括尾部级分。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述hmw级分包含介于约0.3柱体积(cv)与约5毫吸光度单位(mau)之间的洗脱液。
17.根据权利要求15所述的方法，其中所述主级分包含介于约5mau与约40mau之间的洗脱液。
18.根据权利要求15所述的方法，其中所述尾部级分包含介于约40mau与约10mau之间或介于约40mau与约3mau之间的洗脱液。
19.根据权利要求15所述的方法，其中所述lmw级分包含介于约10mau与约1.1cv之间或介于约3mau与约1.1cv之间的洗脱液。
20.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤(b)的所述lc-ms分析之前，使所述级分经受酶促消化。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述酶促消化为有限消化。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述酶促消化是通过使所述级分与胰蛋白酶接触来进行的。
23.根据权利要求20所述的方法，其中所述酶促消化是通过使所述级分与消化酶以介于约1:100与约1:2000之间、介于约1:200与约1:2000之间、约1:100、约1:200、约1:300、约1:400、约1:500、约1:1000或约1:2000的酶与蛋白质的比率接触来进行的。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述酶与蛋白质的比率为约1:200。
25.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤(b)的所述lc-ms分析之前，使所述级分经受酸沉淀。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述酸沉淀包括使所述级分与约1％的三氟乙酸接触。
27.根据权利要求1(b)所述的方法，其中所述液相色谱法包括反相液相色谱法、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法、亲和色谱法、疏水相互作用色谱法、亲水相互作用色谱法、混合模式色谱法或其组合。
28.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪为电喷雾电离质谱仪、纳米电喷雾电离质谱仪或基于orbitrap的质谱仪，其中所述质谱仪耦接到所述液相色谱法系统。
29.一种用于鉴定样品中的宿主细胞蛋白(hcp)杂质的方法，所述方法包括：
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述至少一种所关注的蛋白质为抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、融合蛋白、抗体-药物缀合物、抗体片段或蛋白质药物产品。
31.根据权利要求29所述的方法，其中上样到所述sec柱上的蛋白质的量介于约0.5mg与约20mg之间、介于约1mg与约10mg之间、介于约8mg与约12mg之间，为约1mg、约5mg、约10mg或约20mg。
32.根据权利要求29所述的方法，其中上样到所述sec柱上的蛋白质的量为约10mg。
33.根据权利要求29所述的方法，其中所述级分包括高分子量(hmw)级分、主级分和低分子量(lmw)级分。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述级分进一步包括尾部级分。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述hmw级分包含介于约0.3柱体积(cv)与约5毫吸光度单位(mau)之间的洗脱液。
36.根据权利要求34所述的方法，其中所述主级分包含介于约5mau与约40mau之间的洗脱液。
37.根据权利要求34所述的方法，其中所述尾部级分包含介于约40mau与约10mau之间或介于约40mau与约3mau之间的洗脱液。
38.根据权利要求34所述的方法，其中所述lmw级分包含介于约10mau与约1.1cv之间或介于约3mau与约1.1cv之间的洗脱液。
39.根据权利要求29(e)所述的方法，其中所述液相色谱法包括反相液相色谱法、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法、亲和色谱法、疏水相互作用色谱法、亲水相互作用色谱法、混合模式色谱法或其组合。
40.根据权利要求29所述的方法，其中所述质谱仪为电喷雾电离质谱仪、纳米电喷雾电离质谱仪或基于orbitrap的质谱仪，其中所述质谱仪耦接到所述液相色谱法系统。
41.一种用于表征宿主细胞蛋白(hcp)杂质与所关注的蛋白质的结合的方法，所述方法包括：
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述所关注的蛋白质为抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、融合蛋白、抗体-药物缀合物、抗体片段或蛋白质药物产品。
43.根据权利要求41所述的方法，其中上样到所述sec柱上的蛋白质的量介于约0.5mg与约20mg之间、介于约1mg与约10mg之间、介于约8mg与约12mg之间，为约1mg、约5mg、约10mg或约20mg。
44.根据权利要求43所述的方法，其中上样到所述sec柱上的蛋白质的量为约10mg。
45.根据权利要求41所述的方法，其中所述流动相包括约10mm的磷酸盐和约150mm的nacl。
46.根据权利要求41所述的方法，其中所述变性流动相为温和变性流动相。
47.根据权利要求41所述的方法，其中所述变性流动相包括乙腈，任选地其中所述乙腈的浓度介于约5％v/v与约20％v/v之间、介于约10％v/v与约20％v/v之间、介于约15％v/v与约20％v/v之间，为约5％v/v、约10％v/v、约15％v/v或约20％v/v。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述乙腈的浓度为约20％v/v。
49.根据权利要求41所述的方法，其中所述级分包括高分子量(hmw)级分、主级分和低分子量(lmw)级分。
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述级分进一步包括尾部级分。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述hmw级分包含介于约0.3柱体积(cv)与约5毫吸光度单位(mau)之间的洗脱液。
52.根据权利要求50所述的方法，其中所述主级分包含介于约5mau与约40mau之间的洗脱液。
53.根据权利要求50所述的方法，其中所述尾部级分包含介于约40mau与约10mau之间或介于约40mau与约3mau之间的洗脱液。
54.根据权利要求50所述的方法，其中所述lmw级分包含介于约10mau与约1.1cv之间或介于约3mau与约1.1cv之间的洗脱液。
55.根据权利要求41所述的方法，其进一步包括在步骤(d)的所述lc-ms分析之前，使所述级分经受酶促消化。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述酶促消化为有限消化。
57.根据权利要求55所述的方法，其中所述酶促消化是通过使所述级分与胰蛋白酶接触来进行的。
58.根据权利要求55所述的方法，其中所述酶促消化是通过使所述级分与消化酶以介于约1:100与约1:2000之间、介于约1:200与约1:2000之间、约1:100、约1:200、约1:300、约1:400、约1:500、约1:1000或约1:2000的酶与蛋白质的比率接触来进行的。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述酶与蛋白质的比率为约1:200。
60.根据权利要求41(d)所述的方法，其中所述液相色谱法包括反相液相色谱法、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法、亲和色谱法、疏水相互作用色谱法、亲水相互作用色谱法、混合模式色谱法或其组合。
61.根据权利要求41所述的方法，其中所述质谱仪为电喷雾电离质谱仪、纳米电喷雾电离质谱仪或基于orbitrap的质谱仪，其中所述质谱仪耦接到所述液相色谱法系统。
62.一种用于鉴定样品中的宿主细胞蛋白(hcp)杂质的方法，所述方法包括：
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述至少一种所关注的蛋白质为抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、融合蛋白、抗体-药物缀合物、抗体片段或蛋白质药物产品。
64.根据权利要求62所述的方法，其中所述样品在所述解离试剂中温育约5分钟至约120分钟、约15分钟、约30分钟、约60分钟或约120分钟。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述解离试剂包括至少一种表面活性剂，任选地其中所述至少一种表面活性剂的浓度介于约20mm与约120mm之间，...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖辉，李宁，赵博，H·托莫诺，胡梦琦，R·莫尔登，胡云丽，黄瑜，邱海波，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：
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