【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片及其制备方法。
技术介绍
1、南瓜(学名：cucurbitapepo)，又名番瓜、饭瓜、菜瓜，是葫芦科南瓜属的植物，一年生蔓生草本。南瓜是重要的蔬菜和粮食作物，其种子富含优质蛋白质，营养价值高，易消化吸收，氨基酸组成与身体组织蛋白质接近，因此近几年被学者们重点关注。同时，南瓜籽蛋白还具有防癌、抗癌、抗菌、抗病毒、抗糖尿病和降血压的生物活性，其在医药领域的应用前景十分广阔。
2、随着分子生物学的发展，越来越多的证据表明，活性肽可以直接被人体吸收并参与多种生物学活动，如细胞凋亡、细胞生长、免疫反应等。活性肽具有分子量小、结构简单、生物活性高等特点，被认为具有极大的医学价值和营养价值。
3、小分子肽在医药领域应用广泛，可用于治疗多种疾病，如糖尿病、炎症和各类癌症。小分子肽还可用于抑菌、抗病毒领域，通过与病毒表面抗原相互作用，影响病毒与宿主细胞间相互识别、结合，达到抗病毒作用。小分子肽也可改善心血管功能，具有降低血胆固醇、降血压、扩张血管、改善心肌缺血等作用。小分子肽还可促进机体营养吸收、促进骨骼发育、提供机体能量、抵抗疲劳，具有多种健康益处。最重要的是，小分子肽还可以调控免疫功能，增强机体免疫活性，有效抑制肿瘤细胞的增殖并促进肿瘤细胞凋亡，防止肿瘤细胞向周围组织扩散，对癌症的治疗和预防具有重要意义。
4、对于小分子肽的筛选，目前多采用“细胞试验筛选-结构鉴定-动物试验验证”的步骤，该方法包括：首先获取大量小分子肽，通过细胞试验筛选
技术实现思路
1、针对上述现有技术存在的问题和不足，本专利技术的目的是提供一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片及其制备方法，本专利技术所制得的小分子肽药片，具有优秀的抗氧化和抗乳腺癌活性。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、南瓜籽蛋白序列获取：从uniprot获得南瓜籽蛋白序列；
5、s2、将s1步骤中获得的南瓜籽蛋白序列，提交至在线处理工具中，选择胃蛋白酶和胰蛋白酶水解南瓜籽蛋白，获得胃肠道消化后的活性肽序列；
6、s3、利用在线数据库对s2获得的多肽序列进行安全性预测；
7、s4、利用分子对接方法，筛选对氧化应激和乳腺癌相关靶点具有抑制潜力的活性肽；
8、s5、小分子肽的合成；
9、s6、小分子肽药片的制备。
10、优选的，s1步骤中使用的南瓜籽蛋白序列如下：
11、q39649，2s种子贮藏白蛋白，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/q39649/entry；p13744，11s种子球蛋白β亚基，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/p13744/entry；a0a6j1k8h1，11s种子贮藏球蛋白，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1k8h1/entry；a0a6j1i6z1，种子生物素蛋白sbp65，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1i6z1/entry；a0a6j1jdb2，12s种子贮藏蛋白-crd，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1i6z1/entry；a0a6j1iu23，vicilin样种子贮藏蛋白at2g18540，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/p13744/entry；a0a6j1jbk8，2s富含硫的种子贮藏蛋白，网址https://www.uniprot.org/uniprotkb/a0a6j1jbk8/entry。
12、优选的，所述s2中在线处理工具网址为：http://web.expasy.org/peptide_cutter/。
13、优选的，s3步骤中利用peptideranker、toxinpred和innovagen对s2获得的多肽序列进行潜在活性、毒性、亲水性、疏水性、电荷和溶解性的预测。
14、优选的，peptideranker(http://distilldeep.ucd.ie/peptide ranker/)用于预测肽的潜在活性；toxinpred(http://www.imtech.res.in/raghava/toxinpred/)用于预测肽的毒性、疏水性、亲水性、电荷；innovagen(http://www.innovagen.com/proteomics-tools)用于预测肽的溶解性。
15、优选的，s4中利用分子对接方法，筛选对氧化应激和乳腺癌相关靶点具有抑制潜力的活性肽，包括如下步骤：
16、(1)3d结构的获取：从rcsb(http://www.rcsb.org/pdb)数据库获得tp53，phgdh，caspase3，keap1的3d结构；
17、(2)构建活性肽结构：使用chemdraw和chem3d构建活性肽结构；
18、(3)分子对接：将步骤(1)中的tp53，phgdh，caspase3，keap1去除配体和水分子后，与s2获得的多肽序列一同添加非极性氢和高斯电荷，使用autodock 4.2软件分别进行多肽与tp53、多肽与phgdh、多肽与caspase3、多肽与keap1的半柔性分子对接；
19、(4)分子对接后，根据结合能结果筛选出对氧化应激和乳腺癌相关靶点表现出最佳结合的活性肽。
20、进一步优选的，所述tp53为肿瘤蛋白p53；phgdh为磷酸甘油酸脱氢酶；caspase3为胱天蛋白酶3；keap1为胞质接头蛋白。
21、优选的，对tp53表现出最强结合的活性肽为ypsppy、fpf、istany、iiv、ipqn、vcppl、ctair、vvpr、qpr、iipqn；
22、对phgdh表现出最强结合的活性肽为gienpw、iipqn、qgsevw、gqqer、vnapql、mphpck、ddgse、tpppgy、qivqr、tirpk；
23、对caspase3表现出最强结合的活性肽为gveew、ew、ey、ddgse、df、eea、nvgpe、eel、deeer、pdih。
24、进一步优选的，与tp53、phgdh、caspase3紧密结合的具备较强抗癌活性的活性肽为ypsppy、fpf、istany、iiv、gienpw、iipqn、qgsevw、gveew、ew、ey。
25、优选的，对本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S3步骤中利用PeptideRanker、Toxinpred和Innovagen对S2获得的多肽序列进行潜在活性、毒性、亲水性、疏水性、电荷和溶解性的预测。
3.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于，PeptideRanker用于预测肽的潜在活性；Toxinpred用于预测肽的毒性、疏水性、亲水性、电荷；Innovagen用于预测肽的溶解性。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S4中利用分子对接方法，筛选对氧化应激和乳腺癌相关靶点具有抑制潜力的活性肽，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，对TP53表现出最强结合的活性肽为YPSPPY、FPF、ISTANY、IIV、IPQN、VCPPL、CTAIR、VVPR、QPR、IIPQN；
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S5中采用Fmoc固相合成方法将步骤S4中筛选出的活性肽合成小分子肽。
...【技术特征摘要】
1.一种南瓜籽蛋白源抗氧化抗癌小分子肽药片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，s3步骤中利用peptideranker、toxinpred和innovagen对s2获得的多肽序列进行潜在活性、毒性、亲水性、疏水性、电荷和溶解性的预测。
3.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于，peptideranker用于预测肽的潜在活性；toxinpred用于预测肽的毒性、疏水性、亲水性、电荷；innovagen用于预测肽的溶解性。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，s4中利用分子对接方法，筛选对氧化应激和乳腺癌相关靶点具有...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢妮，张德举，熊娟，姜凯，甘懿铭，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。