【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物分析，具体涉及一种分离测定伊布替尼中遗传毒性杂质的lc-ms/ms法。
技术介绍
1、伊布替尼(ibrutinib)，是全球首个获批上市的布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂，也是一种不可逆抑制剂。伊布替尼在多种b细胞恶性肿瘤的治疗中展现出显著的疗效，尤其在血液肿瘤领域，如套细胞淋巴瘤(mcl)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、小淋巴细胞淋巴瘤(sll)以及华氏巨球蛋白血症(wm)等。伊布替尼通过与btk活性位点上的半胱氨酸残基共价结合，从而不可逆地抑制btk的活性。btk在b细胞受体(bcr)信号通路中起着关键作用，伊布替尼通过阻断这一信号通路，抑制肿瘤b细胞的恶性增殖并诱导细胞凋亡。同时，伊布替尼还可能通过减少分泌细胞趋化因子及促炎细胞因子，下调抗凋亡蛋白bcl-2家族的表达水平，进一步抑制肿瘤细胞的生长、黏附、侵袭和迁移。因此，伊布替尼在b细胞恶性肿瘤的治疗中发挥着重要作用。
2、伊布替尼的结构式如式ⅰ所示。在伊布替尼合成工艺的研究中发现，伊布替尼合成过程中容易引入杂质sm3a和杂质z6k。杂质sm3a的结构式如式ⅱ所示，杂质z6k的结构式如式ⅲ所示。
3、
4、杂质sm3a和杂质z6k均是含有警示结构的遗传毒性杂质，在伊布替尼药物合成和制剂过程中需要对该两种杂质的含量进行严格控制。杂质sm3a和杂质z6k限度要求23.5ppm，但常规的lc或gc方法灵敏度根本无法满足要求。现有技术中，公开号为cn104407067a的专利公开了一种依鲁替尼及其对映异构体杂质的液相分离检测方
5、目前尚未发现专门针对伊布替尼中杂质sm3a和杂质z6k的分离测定方法的相关文献或专利报道。因此，有必要开发一种方便快捷且灵敏度高的检测方法，用于杂质sm3a和杂质z6k的控制。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种采用lc-ms/ms法分离伊布替尼中遗传毒性杂质的方法，该方法可以在25分钟内或大于25分钟的时间分离伊布替尼中的遗传毒性杂质，为后续杂质的定性和定量提供了支持。
2、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、采用lc-ms/ms法分离伊布替尼中遗传毒性杂质的方法，所述遗传毒性杂质包括杂质sm3a、杂质z6k中的任一种或两种；所述伊布替尼的结构式如式ⅰ所示，所述杂质sm3a的结构式如式ⅱ所示，所述杂质z6k的结构式如式ⅲ所示；所述lc-ms/ms法包括：采用反相酰胺键合硅胶为色谱柱填充剂，以甲酸水为流动相a，乙腈为流动相b，通过梯度洗脱将伊布替尼中遗传毒性杂质进行分离；
4、
5、进一步，所述梯度洗脱设置如下：
6、0min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为50～70:50～30；
7、6min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为50～70:50～30；
8、6.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为30～50:70～50；
9、10min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为30～50:70～50；
10、10.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为1～3:99～97；
11、20min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为1～3:99～97；
12、20.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为50～70:50～30；
13、25min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为50～70:50～30。
14、作为优选，所述梯度洗脱设置如下：
15、0min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为58～62:42～38；
16、6min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为58～62:42～38；
17、6.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为38～42:62～58；
18、10min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为38～42:62～58；
19、10.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为1～2:99～98；
20、20min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为1～2:99～98；
21、20.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为58～62:42～38；
22、25min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为58～62:42～38。
23、作为最优选，所述梯度洗脱设置如下：
24、0min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为60:40；
25、6min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为60:40；
26、6.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为40:60；
27、10min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为40:60；
28、10.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为1:99；
29、20min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为1:99；
30、20.1min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为60:40；
31、25min，所述流动相a和所述流动相b的体积比为60:40。
32、进一步，所述流动相a为浓度为0.05％～0.2％的甲酸水溶液。
33、作为优选，所述流动相a为浓度为0.1％的甲酸水溶液。
34、进一步，所述色谱柱的柱温为30±2℃，所述流动相的流速为1±0.2ml/min。
35、作为优选，所述色谱柱的柱温为30℃，所述流动相的流速为1ml/min。
36、作为优选，所述色谱柱的规格为4.6mm×150mm，5μm。
37、作为最优选，所述色谱柱选择supelco rp-amide 4.6mm×150mm，5μm。
38、作为优选，进样体积为20μl。
39、作为优选，运行时间为25分钟。
40、本专利技术的目的之二在于提供一种鉴别伊布替尼中是否含有遗传毒性杂质的方法，该方法可以鉴别浓度低至5.6ng/ml的杂质，检测限低，灵敏度高。
41、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
42、鉴别伊布替尼中是否含有遗传毒性杂质的方法，包括如下步骤：
43、(1)分离：采用前述分离方法对伊布替尼中遗传毒性杂质进行分离；
44、(2)检测：采用串联四极杆质谱检测器进行检测，得到色谱图；
45、(3)鉴别：对比检测品与对照品的色谱行为，判断检本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.采用LC-MS/MS法分离伊布替尼中遗传毒性杂质的方法，其特征在于，所述遗传毒性杂质包括杂质SM3a、杂质Z6k中的任一种或两种；所述伊布替尼的结构式如式Ⅰ所示，所述杂质SM3a的结构式如式Ⅱ所示，所述杂质Z6k的结构式如式Ⅲ所示；所述LC-MS/MS法包括：采用反相酰胺键合硅胶为色谱柱填充剂，以甲酸水为流动相A，乙腈为流动相B，通过梯度洗脱将伊布替尼中遗传毒性杂质进行分离；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱设置如下：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为浓度为0.05％～0.2％的甲酸水溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30±2℃，所述流动相的流速为1±0.2ml/min。
5.鉴别伊布替尼中是否含有遗传毒性杂质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，采用电喷雾离子源正离子模式下多反应检测。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用质荷比179.0→125.0作为所述杂质
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，保留时间在8.47±0.5min的是杂质SM3a；保留时间在5.11±0.5min的是杂质Z6k 。
9.检测伊布替尼中遗传毒性杂质含量是否合格的方法，其特征在于，包括如下步骤：
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，若样品溶液中杂质SM3a和杂质Z6k的峰面积均不大于对照品溶液中杂质SM3a和杂质Z6k的峰面积，表示样品溶液中遗传毒性杂质含量合格；反之，若样品溶液中杂质SM3a和/或杂质Z6k的峰面积大于对照品溶液中杂质SM3a和/或杂质Z6k的峰面积，表明样品溶液中遗传毒性杂质含量不合格。
...【技术特征摘要】
1.采用lc-ms/ms法分离伊布替尼中遗传毒性杂质的方法，其特征在于，所述遗传毒性杂质包括杂质sm3a、杂质z6k中的任一种或两种；所述伊布替尼的结构式如式ⅰ所示，所述杂质sm3a的结构式如式ⅱ所示，所述杂质z6k的结构式如式ⅲ所示；所述lc-ms/ms法包括：采用反相酰胺键合硅胶为色谱柱填充剂，以甲酸水为流动相a，乙腈为流动相b，通过梯度洗脱将伊布替尼中遗传毒性杂质进行分离；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱设置如下：
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相a为浓度为0.05％～0.2％的甲酸水溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30±2℃，所述流动相的流速为1±0.2ml/min。
5.鉴别伊布替尼中是否含有遗传毒性杂质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜波，倪科，薛倩，谭莉，
申请(专利权)人：重庆华邦制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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