【技术实现步骤摘要】
本申请属于高通量测序，具体涉及一种滚环扩增的方法以及dna纳米球的制备方法。
技术介绍
1、滚环扩增（rca）是一种在二代测序及原位测序等领域常见的文库扩增方法。通过环状dna为起始模板，在具有链置换功能的聚合酶的作用下，在等温环境中进行扩增。其产物是一根线性的，多个与环状dna序列反向互补的序列的连续。其产物的形态可以通过环状dna上的固定序列进行一定程度的调控。相对pcr而言，滚环扩增的扩增倍数较少，但是不需要频繁的变温，同时可以避免pcr带来的错误累积。因此在特定情况下，比pcr更有优势。
2、滚环扩增相对于其他扩增而言，最重要的是环状dna的制作。这一步骤极为繁琐。以常规pcr产生的双链dna为例，首先需要对其单链化，即选择一条链进行消化，同时对剩余单链的5’端要进行磷酸化。在获得单链状态，5’磷酸化后的dna单链模板后，要通过能与该dna单链首尾同时杂交的成环引物，将dna单链模板的3’端引导至5’端，且处于3’端碱基3’羟基与5’端碱基的5’磷酸基团处于相邻位置。之后在dna连接酶的作用下，将dna单链模板的3’...
【技术保护点】
1.滚环扩增的方法，其特征在于，所述方法在恒温条件下进行的，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，引入的包括所述成环片段、所述连接酶和所述聚合酶的试剂总体积是所述变性体系体积的1-1000倍；
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述变性剂包括强碱和甲酰胺中的一种或多种；
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，变性的时间不超过5min。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述恒温条件为40℃-80℃；
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述连接酶是...
【技术特征摘要】
1.滚环扩增的方法，其特征在于，所述方法在恒温条件下进行的，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，引入的包括所述成环片段、所述连接酶和所述聚合酶的试剂总体积是所述变性体系体积的1-1000倍；
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述变性剂包括强碱和甲酰胺中的一种或多种；
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，变性的时间不超过5min。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述恒温条件为40℃-80℃；
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述连接酶是耐热型的连接酶，所述聚合酶是耐热型的聚合酶，所述连接酶和所述聚合酶适合的反应温度在20℃-100℃范围内。
7.根据权利要求1或2所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈曦，谢槟，陈星羽，肖育劲，
申请(专利权)人：深圳市大道测序生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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