【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本文提供用于以装置检测蛋白合成的方法和组合物。所述方法适用于在微流体装置上的监测。
技术介绍
0、专利技术背景
1、当在微流体装置，诸如数字微流体装置中以微流体规模进行无细胞蛋白合成时，实时检测由所述无细胞蛋白合成反应合成的蛋白是有用的。然而，在无细胞蛋白合成反应环境中进行蛋白的实时检测是困难的。反应含有高浓度的许多其它蛋白和生物分子，使得通过标准的蛋白染色方法(例如考马斯亮蓝g-250、syprotm ruby、银染色)的非特异性蛋白检测困难。免疫染色或基于亲和力的纯化接着进行非特异性蛋白染色同样无济于事，因为必须在固体支持物上进行大量洗涤以防止背景干扰。由于已知在微流体和数字微流体装置中洗涤是困难的，背景干扰可能变得令人困扰。
2、目前现有的发光互补方法不能在无细胞蛋白合成反应中实现长期的实时检测，无细胞蛋白合成反应往往超过16小时。这种限制是由于多种原因造成的，包括与无细胞蛋白合成o2需求相竞争的发光酶的o2消耗以及在重组蛋白表达检测的3-24小时内发光底物的暂时或永久耗尽。
3、所...
【技术保护点】
1.一种用于监测数字微流体装置上的液滴中的无细胞蛋白合成的方法，其包括
2.如权利要求1所述的方法，其中所述转录和翻译发生在裂解物系统中，所述裂解物系统选自人裂解物系统、兔网状细胞裂解物(RRL)系统、中国仓鼠卵巢裂解物系统、小麦胚芽无细胞系统、大肠杆菌全细胞裂解物系统或其混合物。
3.如权利要求1中任一项所述的方法，其中所述体外转录和翻译发生在纯化的重组元件(PURE)系统中。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述体外转录和翻译是偶联的。
5.如权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述ccGFP11肽标签...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于监测数字微流体装置上的液滴中的无细胞蛋白合成的方法，其包括
2.如权利要求1所述的方法，其中所述转录和翻译发生在裂解物系统中，所述裂解物系统选自人裂解物系统、兔网状细胞裂解物(rrl)系统、中国仓鼠卵巢裂解物系统、小麦胚芽无细胞系统、大肠杆菌全细胞裂解物系统或其混合物。
3.如权利要求1中任一项所述的方法，其中所述体外转录和翻译发生在纯化的重组元件(pure)系统中。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述体外转录和翻译是偶联的。
5.如权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述ccgfp11肽标签的长度为至少13个氨基酸，且至少含有序列lqehavak。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述ccgfp11肽标签序列选自
7.如权利要求1到6中任一项的方法，其中所述ccgfp1-10多肽序列与seq id no：4、5或7具有大于90％的同源性。
8.如权利要求7的方法，其中所述序列与以下全序列具有大于95％的同源性：
9.如权利要求1到8中任一项的方法，其中所述所关注的蛋白与多个肽标签融合。
10.如权利要求1到9中任一项的方法，其中所述所关注的蛋白是单一蛋白，诸如tdt、ifnβ 1-α、vegf，或者是蛋白-蛋白复合物或更大的组装体诸如噬菌体的蛋白部分。
11.如权利要求10的方法，其中所述所关注的蛋白是末端脱氧核苷酸转移酶(tdt)或其截短形式，或其它物种中末端脱氧核苷酸转移酶(tdt)的同源氨基酸序列，或任何物种的po...
【专利技术属性】
技术研发人员：I·H·库克，F·米特尔伯格，T·W·B·奥斯特，
申请(专利权)人：核蛋白有限公司，
类型：发明
国别省市：
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