【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析检测，具体涉及一种基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法。
技术介绍
1、牛奶和乳制品富含蛋白质、脂肪、维生素和矿物质等，是人类膳食营养的重要来源之一。越来越多证据表明，按推荐量食用乳制品可以改善人体健康状态，包括改善免疫系统功能、降低心血管风险、降低骨质流失风险等，这使得牛奶和乳制品愈发受到消费者的青睐。近年来，国内外牛奶和乳制品的消费量呈上升趋势。2022年，中国人均奶类消费量约43公斤，与2010年相比提高了48.3％。为满足市场消费需求，乳制品在生产过程中需要经过热加工处理，以确保产品微生物安全和延长货架期。然而，牛奶中富含的乳糖和酪蛋白等物质会在热处理过程中发生美拉德反应，导致乳制品的营养和风味发生变化。几种典型的美拉德反应产物，如4-甲基咪唑(4-methylimidazole,4-mei)、糠氨酸(furosine)、糠醛类化合物和晚期糖化终末产物(advanced glycation end products,ages)等已被证实与肾毒性、神经性退行疾病、糖尿病等慢性疾病相关，对人体造成潜在威胁。因此，从乳制品中的摄入美拉德反应有害产物的问题引起消费者的重视。
2、建立高效、准确的乳制品中美拉德反应有害产物的检测方法，对于监测乳制品加工和储藏过程中的美拉德反应有害产物含量变化，以及控制美拉德反应有害产物的生成具有重要意义。
3、目前，乳制品中的典型美拉德反应有害产物检测方法主要包括高效液相色谱法(hplc)、气相色谱-质谱联
4、在前面提到的方法中，hplc-ms/ms法适用于大部分美拉德反应有害产物的检测。超高效液相色谱(ultra-high performance liquid chromatography，uplc)技术是在hplc基础上，使用更小颗粒填料和系统体积，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量，缩短了分析时间。
5、超高分辨率四级杆飞行时间质谱(ultra resolution quadrupole time offlight mass spectrometer)结合多级质谱进行碎片分子量测定，具有高分辨率和高灵敏度。目前超高效液相色谱-超高分辨率四级杆-飞行时间联质谱(uplc-q-tof/ms)技术已广泛应用于食品中组分和外源物含量分析中。因此，本专利技术旨在基于uplc-q-tof/ms技术，建立一种同步检测乳制品中4-mei、糠氨酸和cml含量的方法，在优化样品前处理方法的同时进行方法学评价，为乳制品中的美拉德反应有害产物提供一种快速准确的检测方法。
技术实现思路
1、为了克服以上现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑(4-mei)、糠氨酸和羧甲基赖氨酸(cml)的方法，快速地反映有害产物的含量变化并及时地做出工艺条件的调整。
2、本专利技术的目的通过以下的技术方案实现：
3、一种基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法包括以下具体步骤：
4、(1)对液态乳样品进行脱脂处理，然后加入酸溶液，在80-140℃下水解2-24h，得到水解样品，将所述水解样品过滤后上机测试；
5、(2)采用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱法对待测样品进行同步检测，通过外标法计算得到4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的含量；
6、其中，色谱条件包括：agilent proshell 120sb-c18色谱柱；样品温度：4-25℃；柱温：20-30℃；进样量：2μl；流速：0.3ml/min；流动相a包括体积百分比浓度为0.1-0.5％甲酸溶液与体积百分比浓度为99.9％的水，流动相b为甲醇，梯度洗脱程序；
7、质谱条件包括：电喷雾离子源，正向模式，雾化器和喷撞气均为氮气；反应监测采用全扫模式；质谱获取：离子源喷射电压，5000v；气体温度：550℃；离子源气体1：60psi；离子源气体2：60psi；帘气：35psi；cad气体：7psi；去簇电压：80v；碰撞能量：7v，ce扩散系数：3v；ms/ms图谱获取：ida小分子模式；最大候选离子：10；强度阈值：10cps；去簇电压：80v；碰撞能量：15v；ce扩散系数：15v。
8、更优选的，所述水解的时间为6h。
9、更优选地，所述水解的温度为110℃。
10、优选的，所述梯度洗脱程序参数包括：
11、
12、优选的，4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的质谱检测条件为：
13、
14、优选的，步骤(1)中所述的脱脂处理具体步骤如下：
15、将所述液态乳样品加入正己烷振荡后离心，弃去溶剂，重复若干次。
16、优选的，所述离心的速率为3000-10000r/min，时间为3-10min。
17、优选的，所述正己烷的使用量为所述液态乳的体积的1-3倍。
18、优选的，步骤(1)中所述酸溶液为盐酸，所述盐酸的浓度为6-12mol/l。
19、更优选地，所述盐酸的浓度为10.6mol/l。
20、优选的，步骤(2)中所述外标法的具体步骤如下：
21、分别配制浓度为1、5、10、25、50、100、150、200、250、500、1000和2000ng/ml的4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸混合标准系列溶液，以标样浓度为横坐标，标样峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，求曲线线性回归方程，由此计算样品中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的含量。
22、更优选的，所述混合标准溶液的配制具体步骤如下：
23、将4-mei标准品、糠氨酸标准品和cml标准品分别用超纯水和盐酸溶液溶解，得到4-mei标准溶液、糠氨酸标准溶液和cml标准溶液，将所述4-mei标准溶液、糠氨酸标准溶液和所述cml标准溶液进行混合定本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
2.根据权利要求1所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序参数包括：
3.根据权利要求1所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的质谱检测条件为：
4.根据权利要求1所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的脱脂处理具体步骤如下：
5.根据权利要求4所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，所述离心的速率为3000-10000r/min，时间为3-10min。
6.根据权利要求4所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其
7.根据权利要求1所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，步骤(1)中所述酸溶液为盐酸，所述盐酸的浓度为6-12mol/L。
8.根据权利要求1所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，步骤(2)中所述外标法的具体步骤如下：
9.根据权利要求8所述的基于UPLC-Q-TOF-MS同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，4-甲基咪唑的标准曲线线性回归方程为y＝693725x-2767.8，糠氨酸的标准曲线线性回归方程为y＝843926x-7755.1，羧甲基赖氨酸的标准曲线线性回归方程为y＝235829x-1985.7。
...【技术特征摘要】
1.一种基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
2.根据权利要求1所述的基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序参数包括：
3.根据权利要求1所述的基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的质谱检测条件为：
4.根据权利要求1所述的基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的脱脂处理具体步骤如下：
5.根据权利要求4所述的基于uplc-q-tof-ms同步检测液态乳中4-甲基咪唑、糠氨酸和羧甲基赖氨酸的方法，其特征在于，所述离心的速率为3000-10000r/min，时间为3-10min。
6.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐文龙，廖丽娟，任新志，何焕元，刘端，黄敏，林华彪，
申请(专利权)人：深圳市晨光乳业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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