一株特异性分泌BP26抗体的单克隆细胞株2D3、单链抗体及制备方法技术

本发明专利技术提供了一株特异性分泌BP26抗体的单克隆细胞株2D3、单链抗体及制备方法，属于兽医生物技术领域。本发明专利技术表达和纯化了犬种布鲁菌BP26蛋白。通过该蛋白免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞体外融合，获得特异性分泌BP26抗体的单克隆细胞株2D3。之后，提取该单克隆细胞2D3的RNA，反转录为cDNA，扩增表达单克隆抗体的V<subgt;L</subgt;和V<subgt;H</subgt;，并将V<subgt;L</subgt;和V<subgt;H</subgt;基因连接，获得单链抗体基因。将该基因与pCold‑TF载体进行连接，转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达，得到针对犬种布鲁菌BP26蛋白的单链抗体。本发明专利技术针对犬种布鲁菌BP26蛋白的单链抗体可与BP26蛋白结合，对于开发新型的布病检测试剂具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽医生物，尤其涉及一株特异性分泌bp26抗体的单克隆细胞株2d3、单链抗体及制备方法。

技术介绍

1、布鲁菌病，简称布病，是一种重要的人畜共患细菌性传染病。犬种布鲁菌是引起犬布病的主要病原菌之一，也是导致犬不孕不育的原因之一。患病犬进入犬舍后，可通过消化道、呼吸道、皮肤和黏膜接触传播，速度较快，并且大多数公犬呈隐性感染，感染后不表现临床症状，而感染后母犬妊娠期会发生流产，极少数免疫力较低的公犬会表现出睾丸炎、附睾炎、心内膜炎、葡萄膜炎和椎间盘脊柱炎等临床症状。犬种布鲁菌感染后不易发现，且临床血清的特异性抗体会随着时间推移而逐渐降低至无法检出，给临床筛查和治疗带来较大难度。

2、犬布病的防控主要通过检疫和扑杀，犬种布鲁菌相较于其他种属布鲁菌，如牛种和羊种布鲁菌，其表面脂多糖缺失o-抗原结构，表现为粗糙表型。o-抗原是布鲁菌诱导宿主产生检测抗体的主要成份，该组份的缺失导致常规血清学检测方法难以适用于犬种布鲁菌感染的检测。因此，基于免疫原性蛋白的检测方法在犬布病的检测方法的开发中具有重要意义。

3、bp26蛋白为布鲁菌一种主本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一株特异性分泌BP26抗体的单克隆细胞株2D3，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2024年7月4日，保藏编号为：CGMCCNO.46015。

2.根据权利要求1所述特异性分泌BP26抗体的单克隆细胞株2D3，其特征在于，所述特异性分泌BP26抗体的单克隆细胞株的构建方法为：

3.一种针对犬种布鲁菌BP26蛋白的单链抗体，其特征在于，所述针对犬种布鲁菌BP26蛋白的单链抗体是基于权利要求1所述特异性分泌BP26抗体的单克隆细胞株2D3制备的。

4.根据权利要求3所述针对犬种布鲁...

【技术特征摘要】

1.一株特异性分泌bp26抗体的单克隆细胞株2d3，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2024年7月4日，保藏编号为：cgmccno.46015。

2.根据权利要求1所述特异性分泌bp26抗体的单克隆细胞株2d3，其特征在于，所述特异性分泌bp26抗体的单克隆细胞株的构建方法为：

3.一种针对犬种布鲁菌bp26蛋白的单链抗体，其特征在于，所述针对犬种布鲁菌bp26蛋白的单链抗体是基于权利要求1所述特异性分泌bp26抗体的单克隆细胞株2d3制备的。

4.根据权利要求3所述针对犬种布鲁菌bp26蛋白的单链抗体，其特征在于，所述针对犬种布鲁菌bp26蛋白的单链抗体的基因序列如seq id no.9所示。

5.根据权利要求4所述对犬种布鲁菌bp26蛋白的单链抗体的制备方法，其特征在于，所述针对犬种布鲁菌bp26蛋白的单链抗体的氨基酸序列如seq id no.10所示。

6.一种权利要求3～5任一项所述针对犬种...

【专利技术属性】
技术研发人员：田明星，王少辉，孙鹏翔，祁晶晶，鲍衍清，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：