一种通用型CTL细胞及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供一种通用型CTL细胞及其构建方法和应用，通过电穿孔技术递送新型表观编辑器CRISPRoff进入CTL细胞内，靶向细胞中一段B2M基因的超级增强子区域，同时采用不依赖病毒的感染方式，仅需一次表观基因编辑，便可在不改变目标基因DNA序列的前提下，抑制T细胞HLA‑I表达，成功构建出低免疫原性的CTL细胞，实现永久性降低CTL细胞免疫原性，且构建得到的通用型CTL能够规避同种异体免疫排斥反应。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学领域，具体而言，涉及一种通用型ctl细胞及其构建方法和应用。

技术介绍

1、该
技术介绍
的描述仅仅是对为了方便理解本专利技术的内容的一般描述，不构成对本专利技术的任何限制。

2、虽然car-t等t细胞疗法的效果明确，但其临床应用仍受限于自体细胞来源不足、售价高和制备周期长等瓶颈。通用型细胞疗法能克服同种异体细胞免疫排斥、自体细胞来源不足和个性化订制的弊端，有助于提高car-t等t细胞疗法的临床可及性，造福更广泛患者。但目前构建通用型t细胞大都依赖于慢病毒系统介导的基因敲除、基因突变和基因过表达等多重基因编辑技术，不可避免地增加了技术难度和安全风险。

3、目前已有研究者们创造出几种能逃避免疫排斥的通用型t细胞，主要包括以下策略：(1)通过基因编辑敲除b2m基因来避免同种异体t细胞的免疫反应，再通过基因敲入技术过表达hla-e基因来避免同种异体nk细胞的免疫反应；(2)通过基因编辑敲除b2m基因和ciita基因来避免同种异体t细胞的免疫反应，再通过基因敲入技术过表达cd47基因来避免同种异体nk细胞的免疫反应；(3)通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通用型CTL细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，转染复合物包括CTL细胞和质粒混合物；所述质粒混合物中，包括CRISPRoff质粒和sgRNA质粒。

3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，质粒用量为100-200ng。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，CRISPRoff质粒和sgRNA质粒的质量比为1：1。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)电转染参数中，电压为1200V-1600V，电...

【技术特征摘要】

1.一种通用型ctl细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，转染复合物包括ctl细胞和质粒混合物；所述质粒混合物中，包括crisproff质粒和sgrna质粒。

3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，质粒用量为100-200ng。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，crisproff质粒和sgrna质粒的质量比为1：1。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)电转染参数中，电压为1200v-1600v，电脉冲持续时间为10ms-20ms，脉冲次数为2-3次。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中，针对增强子序列设计sg...

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：杭州仙科细胞技术有限公司，
类型：发明
国别省市：