一种诱导人类多能干细胞定向分化为成釉细胞的培养基及培养方法技术

本申请属于培养基开发及应用领域，具体涉及一种诱导人类多能干细胞定向分化为成釉细胞的培养基及培养方法。本申请基于成釉细胞发育学原理，提供一种诱导人类多能干细胞定向分化为成釉细胞的培养基，利用成分明确的生物分子诱导HPSCs依次分化为表面外胚层细胞、牙上皮细胞、成釉细胞；所诱导的成釉细胞不仅表达成釉标志物，而且具有细胞极化形态，是首次在体外诱导HPSCs分化为极化状态的成釉细胞，与体内表型相一致，可用于大批量再生成釉细胞。本申请诱导效果稳定可靠，诱导成分明确，HPSCs定向成釉细胞分化效果稳定，重复性好。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于培养基开发及应用领域，具体涉及一种诱导人类多能干细胞定向分化为成釉细胞的培养基及培养方法。

技术介绍

1、牙釉质位于牙齿表面，为人体最坚硬组织，具有美观、咀嚼、保护牙齿等功能，然而由于龋病、外伤、遗传缺陷等原因，牙釉质经常出现缺损。在牙齿发育过程中，成釉细胞负责产生釉质，但其在人类牙齿萌出后丧失，致使牙釉质受损后无法再生，亦使人体内缺乏研究釉质发育与遗传突变的细胞资源。

2、人类多能干细胞可从人成体细胞经重编程而获得，并可分化为成体组织的任意一种细胞，为成釉细胞再生提供优异“种子细胞”，然而，成釉细胞发育、分化周期较长、调控因子较复杂，已探明100多种生物因子参与成釉细胞发育调控，然而主控成釉细胞分化的“配方”仍不完全清楚。目前，现有技术中诱导人类多能干细胞分化为成釉细胞的方式包括：（1）与小鼠牙胚间充质共培养；（2）与人牙髓干细胞共培养；（3）使用鼠源性成釉细胞条件培养液。

3、然而，现有技术中的诱导策略存在以下不足之处：（1）诱导人类多能干细胞成釉向分化的成分仍不明确，无法高效、大批量诱导人类多能干细胞分化为成釉细胞；本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种诱导人类多能干细胞定向分化为成釉细胞的培养基，其特征在于，包含培养基I、培养基II和培养基III；

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基I包含DMEM/F12培养基以及15v/v%~20v/v%敲除血清替代品、1.5mM~2.5mM L-谷氨酰胺、0.8×10-4M~1.2×10-4M非必须氨基酸、0.5v/v%~1.0v/v%青霉素-链霉素双抗、10μM~20μM SB431542和10ng/mL~25ng/mLBMP4蛋白。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基II包含DMEM/F12培养基以及15ng/mL~25n...

【技术特征摘要】

1.一种诱导人类多能干细胞定向分化为成釉细胞的培养基，其特征在于，包含培养基i、培养基ii和培养基iii；

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基i包含dmem/f12培养基以及15v/v%~20v/v%敲除血清替代品、1.5mm~2.5mm l-谷氨酰胺、0.8×10-4m~1.2×10-4m非必须氨基酸、0.5v/v%~1.0v/v%青霉素-链霉素双抗、10μm~20μm sb431542和10ng/ml~25ng/mlbmp4蛋白。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基ii包含dmem/f12培养基以及15ng/ml~25ng/ml表皮生长因子、20ng/ml~30ng/ml碱性成纤维生长因子、1.0v/v%~2.0v/v%b27添加剂、0.5 v/v%~1.0v/v% 青霉素-链霉素双抗、10ng/ml~25ng/ml bmp4蛋白、0.5μm~1.0μm视黄酸和18mm~22mm氯化锂。

4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基iii包含dmem/f12基础培养基以及8v/v%~12v/v%胎牛血清、10mm ~20mm β-甘油磷酸钠、45μg/ml~55μg/ml维生素c、1.5mm~2.5mm氯化钙、0....

【专利技术属性】
技术研发人员：苗辛超，吴哲，黄超仪，石凯凯，
申请(专利权)人：广州医科大学附属口腔医院广州医科大学羊城医院，
类型：发明
国别省市：